Estudo in vitro dos mecanismos celulares e imunológicos associados à neuropatogênese da infecção pelo vírus Zika

dc.contributorFrança, Rafael Freitas de Oliveira
dc.contributorMarques Junior, Ernesto Torres de Azevedo
dc.contributorFrança, Rafael Freitas de Oliveira
dc.contributorGil, Laura Helena Vega Gonzales
dc.contributorCavalcanti, Milena de Paiva
dc.contributorGomes, Dayane Aparecida
dc.contributorPeliciari - Garcia, Rodrigo Antonio
dc.creatorVieira, Leila Rodrigues de Mendonça.
dc.date2022-08-09T15:48:48Z
dc.date2022-08-09T15:48:48Z
dc.date2019
dc.date.accessioned2023-09-27T00:09:00Z
dc.date.available2023-09-27T00:09:00Z
dc.identifierVIEIRA, Leila Rodrigues de Mendonça.. Estudo in vitro dos mecanismos celulares e imunológicos associados à neuropatogênese da infecção pelo vírus Zika. 2019. 153 p. Tese, (doutorado)-Instituto Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife[sn], 2019.
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/54523
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8897929
dc.descriptionO objetivo do presente trabalho foi avaliar os mecanismos imunológicos e de morte celular desencadeados na infecção pelo ZIKV nas células humanas de linhagem neuronal SH-SY5Y. A caracterização da infecção pelo ZIKV nessas células indica que a progressão da infecção induz a morte de células SH-SY5Y com ativação de caspases e essa morte está associada à produção de mediadores inflamatórios CXCL-10, CCL2, CCL5, IL-8 e IL-6, como observado por dados de qPCR e citometria de fluxo. Esse processo de morte celular envolve a ativação de estresse de retículo endoplasmático e também a ativação da via intrínseca de apoptose com redistribuição intracelular de fatores mitocondriais, observado por análises de citometria de fluxo, microscopia de fluorescência e Western Blot. Em seguida, verificamos se há a ativação das vias dos receptores de morte na infecção através da análise de expressão dos ligantes de morte TRAIL, FasL e TNF-α. Observamos que não há detecção da expressão gênica de TRAIL e FasL, e que embora haja altos níveis do transcrito TNF em células infectadas, a síntese de TNF-α é dispensável para a indução de morte de células SH-SY5Y, já que o tratamento com pentoxifilina não inibiu a morte celular. Por fim, verificamos se o estresse causado por radicais livres estaria envolvido nesse processo através do tratamento de células infectadas com o antioxidante N-acetil-cisteína (NAC) e com o inibidor da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) 1400W. Embora NAC não tenha alterado os níveis de morte celular, a inibição de iNOS reverteu parcialmente a morte celular na infecção pelo ZIKV, sugerindo que essa enzima contribui para esse processo. Em suma, os resultados do presente estudo sugerem que: a infecção pelo ZIKV em células SH-SY5Y ativa a via intrínseca de apoptose; a morte de células SH-SY5Y não é dependente da síntese TNF-α; atividade da iNOS contribui para morte de células SH-SY5Y na infecção pelo ZIKV .
dc.descriptionThe major goal of this study was to analyze which immunological mechanisms and cell death pathways are triggered in human neuronal cell line SH-SY5Y infected with Zika virus (ZIKV). Characterization of ZIKV infection in these cells indicates that the infection induces caspase-mediated cell death, and production of inflammatory cytokines/chemokines CXCL-10, CCL2, CCL5, IL-8 and IL-6, as observed by qPCR and flow cytometry analysis. Cell death during infection induces activation of endoplasmic reticulum stress and intrinsic apoptosis pathway with intracellular redistribution of mitochondrial factors, as observed by flow cytometry, fluorescence microscopy and Western Blot analysis. We checked for activation of death receptor pathways during infection by analyzing death receptor ligands expression TRAIL, FasL and TNF-α, and we observed lack of TRAIL and FasL gene expression in infected cells. Also, TNF-α pathway is probably not required for SH-SY5Y cell death despite high levels of TNF transcripts in infected cells, as treatment with pentoxifylline did not inhibit cell death in infected cells. Finally, we examined the role of free radical stress in ZIKV-induced cell death by treating infected cells with antioxidant N-acetyl cysteine (NAC) and 1400W, an inhibitor of inducible nitric oxide synthase (iNOS). Although NAC did not inhibit cell death, iNOS inhibition partially blocked cell death in ZIKV-infected cells, suggesting that this enzyme may contribute to this process. In conclusion, these data suggest that: ZIKV infection in SH-SY5Y cells activates the intrinsic apoptosis pathway with possible role of ZIKV protein E in this process; TNF-α synthesis is not required for SH-SY5Y cell death during ZIKV infection; iNOS activity contributes to SH-SY5Y cell death in ZIKV infection .
dc.description2024-10-17
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.rightsrestricted access
dc.subjectZika virus
dc.subjectMorte celular
dc.subjectCitocinas
dc.subjectQuimiocinas
dc.subjectMitocôndrias
dc.subjectReceptores de morte celular
dc.subjectRadicais livres
dc.subjectAntioxidantes
dc.subjectÓxido nítrico sintase
dc.subjectZika virus
dc.subjectCell death
dc.subjectCytokines
dc.subjectChemokines
dc.subjectMitochondria
dc.subjectDeath receptors
dc.subjectFree radicals
dc.subjectAntioxidants
dc.subjectOxide nitric synthase
dc.subjectvirus zika
dc.subjectMuerte celular
dc.subjectCitocinas
dc.subjectQuimiocinas
dc.subjectMitocondrias
dc.subjectReceptores de muerte célula
dc.subjectRadicales libres
dc.subjectAntioxidantes
dc.subjectóxido sintasa nítrica
dc.subjectvirus zika
dc.subjectMort cellulaire
dc.subjectCytokines
dc.subjectChimiokines
dc.subjectMitochondries
dc.subjectRécepteurs de la mort cellule
dc.subjectRadicaux libres
dc.subjectAntioxydants
dc.subjectRouille synthase nitrique
dc.subjectZika virus
dc.subjectMorte celular
dc.subjectCitocinas
dc.subjectQuimiocinas
dc.subjectMitocôndria
dc.subjectReceptores de morte celular
dc.subjectRadicais livres
dc.subjectAntioxidante
dc.subjectÓxido nítrico sintase
dc.titleEstudo in vitro dos mecanismos celulares e imunológicos associados à neuropatogênese da infecção pelo vírus Zika
dc.typeThesis


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