Desenvolvimento de sistemas baseados em Nested-PCR convencional e em único tubo para o diagnóstico de leishmaniose visceral

Development systems based on nested-PCR and conventional single tube for the diagnosis of visceral leishmaniasis

dc.contributorMedeiros, Zulma Maria de
dc.contributorMelo, Fábio Lopes de
dc.contributorMontenegro, Silvia Maria Lucena
dc.contributorCavalcanti, Milena de Paiva
dc.contributorAlves, Leucio Camara
dc.contributorRodrigues, Eduardo Henrique Gomes
dc.contributorMedeiros, Zulma Maria de
dc.creatorSilva, Maria Almerice Lopes da
dc.date2015-06-17T12:06:54Z
dc.date2015-06-17T12:06:54Z
dc.date2012
dc.date.accessioned2023-09-26T23:37:20Z
dc.date.available2023-09-26T23:37:20Z
dc.identifierSilva, Maria Almerice Lopes da. Desenvolvimento de sistemas baseados em Nested-PCR convencional e em único tubo para o diagnóstico de leishmaniose visceral. 2012. 99 f. Tese (Doutorado em Saúde Pública) - Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães, Recife, 2012.
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/10891
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8892492
dc.descriptionA leishmaniose visceral ocorre em países dos cinco continentes e quando não tratada pode levar a óbito. Para se evitar esse desfecho, são essenciais o diagnóstico precoce e tratamento adequado. Com o objetivo de contribuir na pesquisa de novos diagnósticos para leishmaniose visceral, esse trabalho propôs desenvolver sistemas baseados em Nested-PCR convencional e em único tubo para o diagnóstico de leishmaniose visceral. A partir de uma revisão na literatura em busca de alvos moleculares utilizados no diagnóstico dessa parasitose, foram selecionados os alvos subunidade menor do RNA ribossômico (ssu rRNA) e espaçador transcrito interno 1 (ITS-1), que compõem o DNA do agente etiológico Leishmania infantum, para o desenvolvimento das nested-PCR. Foi também escolhido o alvo kDNA, o mais aplicado nas abordagens de PCR, para comparações com os sistemas desenvolvidos. Após otimizar todas as PCR com DNA genômico de L. infantum, esses sistemas foram avaliados em amostras de sangue, soro e urina de indivíduos com suspeita de leishmaniose visceral dos hospitais de referência da cidade do Recife - PE. Para utilização da urina, foram avaliados quatro protocolos de extração de DNA e identificou-se que a extração por fenol-clorofórmio, com modificações, foi a de melhor desempenho. Na avaliação com amostras biológicas, as PCR simples e nested-PCR com os alvos ssu rRNA e ITS-1 não tiveram boa sensibilidade ao se usar sangue, e não foram capaz de amplificar DNA do parasito em soro e urina. Esses sistemas desenvolvidos não podem ser usados para o diagnóstico da leishmaniose visceral. No entanto, a kDNAPCR apresentou bons resultados quando avaliada com urina. Mais estudos devem ser feitos para avalia-la como um diagnóstico seguro para esse tipo de amostra biológica. Esse trabalho representa um ponto de início para posteriores estudos que objetivem o aprimoramento e validação da nested-PCR único tubo para o diagnóstico da leishmaniose visceral
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.publisherCentro de Pesquisas Aggeu Magalhães
dc.rightsopen access
dc.subjectLeishmaniose Visceral/diagnóstico
dc.subjectReação em Cadeia da Polimerase/métodos
dc.subjectTécnicas de Diagnóstico e Procedimentos
dc.subjectLeishmania infantum/genética
dc.subjectLeishmania infantum/isolamento & purificaçäo
dc.titleDesenvolvimento de sistemas baseados em Nested-PCR convencional e em único tubo para o diagnóstico de leishmaniose visceral
dc.titleDevelopment systems based on nested-PCR and conventional single tube for the diagnosis of visceral leishmaniasis
dc.typeThesis


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