Indução de tolerância oral a mioblastos humanos em camundongos imunocompetentes

dc.contributorSavino, Wilson
dc.contributorBonomo, Adriana
dc.contributorMonteiro, Clarissa Menezes Maya
dc.contributorGoldenberg, Regina Coeli dos Santos
dc.contributorAlmeida, Vinícius Cotta de
dc.contributorMermelstein, Claudia
dc.contributorPons, Andrea Henriques
dc.creatorBarros, Heitor Pereira
dc.date2017-06-28T13:48:54Z
dc.date2017-06-28T13:48:54Z
dc.date2013
dc.date.accessioned2023-09-26T23:18:47Z
dc.date.available2023-09-26T23:18:47Z
dc.identifierBARROS, H. P. Indução de tolerância oral a mioblastos humanos em camundongos imunocompetentes. 2013. 72f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Molecular) - Fundação Oswaldo Cruz, Instituto Oswaldo Cruz, Rio de janeiro, RJ, 2013
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/19547
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8889184
dc.descriptionO desenvolvimento de novos protocolos que possibilitem o uso de terapia celular é fundamental para o aumento da qualidade de vida em pacientes com doenças genéticas ou desordens malignas. Em particular, pacientes portadores de distrofias musculares de origem genética poderiam se beneficiar desta terapia. No entanto, há uma dificuldade importante a ser suplantada: os mioblastos usados para o tratamento serem provenientes, na maioria dos casos, de doador alogênico ou até xenogênico. Portanto, faz-se necessário o desenvolvimento de protocolos que induzam tolerância no indivíduo a ser tratado, aos mioblastos transplantados. Estas células são capazes de reparar a fibra muscular quando enxertadas no músculo doente, por mecanismo de diferenciação e fusão celular com células musculares pré-existentes. No presente trabalho utilizamos camundongos singênicos C57BL/6, que foram divididos em 3 grupos: experimental, controle positivo, controle negativo. O grupo experimental que recebeu diariamente, por gavagem, extrato de mioblastos/miotubos humanos e Lactococcuslactis, ad libitum por um período de 5 dias; e dois outros grupos (controles negativo e positivo) que receberam PBS oralmente. Após 4 dias, os camundongos foram imunizados com extrato o mesmo extrato, associado ao adjuvante completo de Freund (CFA) ou hidróxido de alumínio no coxim plantar ou intraperitonealmente (grupo experimental e controle positivo) Uma semana após a imunização, todos os grupos receberam um reestimulo, ou foram transplantados com mioblastos no músculo tibialis anterior após criolesão do mesmo. Usando o corante fluorescente CFSE para medir proliferação e iodeto de propídeo para excluir células mortas, constatamos que o grupo experimental apresentava redução de 60% na proliferação quando comparado com o controle positivo. Sete dias após o transplante foi observado, usando bromodeoxiuridina, uma redução de 90% na taxa de proliferação celular nos linfonodos drenantes. No mesmo período, pode-se observar um maior número de células inflamatórias no musculo dos animais não tratados quando comparado com o grupo experimental. As células T do animal tolerizado produzem 50% menos interferon-\03B3. Somente o controle positivo produziu IL-10 e nenhum deles IL-4. Após 1 mês de transplante, somente observamos células humanas no grupo tolerizado. Esses resultados demonstram que o protocolo de tolerância oral modula a resposta imunológica contra o mioblasto in vitro e in vivo, sugerindo portanto seu uso no transplante de precursores miogênicos em indivíduos imunocompetentes
dc.descriptionThe development of new protocols that make possible the use of cell therapies is fundamental for the improvement of life quality in patients hav ing genetic disease s or any malignant disorder. In particular, patients with muscular dystrophies could benefit from this therapy. Nevertheless, there is an important issue to be circumvented: myoblasts used in th e therapy c o me in most cases from allogeneic or even xenogeneic donor s . In this way, the development of protocols that induce tolerance of the host for accept ing the injected myoblasts is necessary. Those cells are capable to repair muscular fiber s when injected into the le sioned muscle, by a mechanism involving cell differentiation and fusion with pre - existing myofibers . Accordingly, the establishment of an experimental protocol induc ing immun o tolerance to myoblasts is necessary for therapeutic rea sons. In the present work w e used s y ngen e ic C57B L /6 mice which were divided in three groups: The experimental group that received daily, by gavage, an extract derived from human myoblast s/myotubes and Lactococcuslactis , for a total of 5 days . T wo groups , namely negative and positive controls , received PBS orally. After 4 days , mice were immunized with myoblast /myotube extract associated to complet e Freund’s adjuvant or al u min u m hydroxide in the footpad or i.p. , ( respectively positive and experimental group s ) , or with CFA or alumin u m hydroxide plus PBS ( n egative group). O ne week after immunization, all groups were boosted with the same protein extract . M yoblasts were then transplanted in the tibialis anterior muscle after a cryolesion in all groups. Using CFSE to measure proliferation and propidium iodide to exclude unviable cells, we found 60 % less proliferation i n the tolerized group , when compared to the positive control group. Using bromodeoxyuridine after myoblast transplantation , we found a reduction of 90% in cell proliferation of lymphocytes from the draining lymph nodes . Seven days post - transplant we could see a higher number of inflammatory cells in the muscle of mice from positive and negative g roup s in comparison with the experimental group. T cells from the tolerized mice produced less than 50% of the interferon - γ produced by the experimental group. Only the positive, non - tolerized group produced IL - 10 and none of them produced IL - 4. Lastly, we could only detect human cells in the muscle of the mice that received the complete oral plus probiotic treatment. The results demonstrate that the protocol of oral tolerance modulates the in vitro and in vivo immune response against transplanted myoblas t s , a promising result for design further strategies using transplantation of myogenic precursor’s immunocompetent individuals .
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.rightsopen access
dc.subjectTolerância ao Transplante
dc.subjectTransplante
dc.subjectMioblastos
dc.subjectTerapia Baseada em Transplante de Células e Tecidos
dc.subjectDistrofias Musculares
dc.subjectCamundongos
dc.titleIndução de tolerância oral a mioblastos humanos em camundongos imunocompetentes
dc.typeDissertation


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