Caracterização molecular e análise da expressão gênica da LaNTPDase-1 em Leishmania amazonensis

dc.contributorMoreira, Otacílio da Cruz
dc.creatorCondelo, Hanna Silva
dc.date2020-01-27T11:21:52Z
dc.date2020-01-27T11:21:52Z
dc.date2017
dc.date.accessioned2023-09-26T23:07:00Z
dc.date.available2023-09-26T23:07:00Z
dc.identifierCONDELO, Hanna Silva. Caracterização molecular e análise da expressão gênica da LaNTPDase-1 em Leishmania amazonensis. 2017. 96 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Molecular) - Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2017.
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/39506
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8887026
dc.descriptionO presente trabalho trata de um estudo sobre as enzimas nucleotideo trifosfato difosfohidrolase de Leishmania (Leishmania) amazonensis (nucleoside triphosphate diphosphohydrolase - LaNTPDase), um dos principais agentes etiológicos da leishmaniose difusa no Brasil. O desenho experimental do estudo contempla uma abordagem estrutural in silico e uma abordagem experimental de expressão genica do gene codificante desta enzima nos promastigotas e amastigotas do parasito. No estudo foi elucidada a sequência nucleotídica codificante correspondente à NTPDase de L. amazonensis. A sequência obtida foi alinhada com NTPDases de outras espécies do gênero Leishmania. Com os ensaios foi possível propor que esta enzima pode estar ligada à membrana plasmática por um domínio transmembranar, sendo denominada NTPDase-1. A estrutura terciária da enzima foi proposta por modelagem por homologia, indicando importantes diferenças estruturais, especialmente na região de ligação aos nucleotídeos. Expressão heteróloga da enzima de L. amazonensis (rLaNTPDase-1) foi realizada indicando uma proteína de 45 kDa em condições desnaturantes Em paralelo, avaliamos a modulação da expressão gênica da LaNTPDase-1 entre dois isolados de L. amazonensis (IFLA/BR/1967/PH8 e MHOM/BR/77/LTB0016), com distintos percentuais de infectividade em macrófagos de camundongos BALB/c cepa PH8 (31,0%±6,3) e cepa LTB0016 (18,2%± 5,3) e perfis diferentes das fases logarítmica e estacionarias de crescimento in vitro dos promastigotas. Observamos que durante a curva de crescimento, somente a cepa PH8 apresentou um aumento na expressão do gene no quarto dia de cultivo (4,3±2), quando comparado com a LTB0016. A expressão da LaNTPDase-1 mostrou-se aumentada nos amastigotas, quando comparada com os promastigotas da cepa PH8 (>5,2±0,8) e da cepa LTB0016 (>0,8±0,5). Os resultados aqui apresentados indicam que o parasito L. amazonensis expressa o gene correspondente a enzima NTPDase-1, sendo que este gene é mais ix expresso nos amastigotas do que nos promastigotas. Estes resultados reforçam a importância desta enzima na fase do parasito quando no hospedeiro vertebrado.
dc.descriptionThe present work deals with a study on the nucleotide triphosphate diphosphohydrolase enzymes of Leishmania (Leishmania) amazonensis (LaNTPDase), one of the main etiological agents of diffuse leishmaniasis in Brazil. The experimental design of the study contemplates an in silico structural approach and an experimental approach of genetic expression of the gene coding for this enzyme in promastigotes and amastigotes parasites. In the study the nucleotide sequence corresponding to the NTPDase of L. amazonensis was elucidated. The sequence obtained was aligned with NTPDases from other species of the genus Leishmania. With the assays it was possible to propose that this enzyme may be bound to the plasma membrane by a transmembrane domain, being called NTPDase-1. The tertiary structure of the enzyme was proposed by homology modeling, indicating important structural differences, especially in the nucleotide binding region. Heterologous expression of the L. amazonensis enzyme (rLaNTPDase-1) was performed indicating a 45 kDa protein under denaturing conditions. In parallel, we evaluated the modulation of LaNTPDase-1 gene expression between two isolates of L. amazonensis (IFLA/BR/1967/PH8 and MHOM/BR/77/LTB0016), with different percentages of infectivity in macrophages of BALB/c mice, strain PH8 (31.0% ± 6.3) and strain LTB0016 (18.2% ± 5.3) and different profiles of the logarithmic and stationary phases of in vitro growth of promastigotes. We observed that during the growth curve, only the PH8 strain showed an increase in gene expression on the fourth day of cultivation (4.3 ± 2) when compared to LTB0016. The expression of LaNTPDase-1 was shown to be increased in the amastigotes compared to the promastigotes of strain PH8 (>5.2± 0.8) and strain LTB0016 (> 0.8±0.5). The results presented here indicate that the parasite L. amazonensis expresses the gene corresponding to the enzyme NTPDase-1, and this gene is more expressed in the amastigotes than in the promastigotes. These results reinforce the importance of this enzyme in the parasite phase when in the vertebrate host.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.rightsopen access
dc.subjectLaNTPDase-1
dc.subjectLeishmania amazonensis
dc.subjectLeishmaniose
dc.subjectNTPDase
dc.subjectNucleoside triphosphate diphosphohydrolase
dc.subjectLeishmania
dc.subjectLeishmaniose
dc.subjectNucleosídeo-trifosfatase
dc.titleCaracterização molecular e análise da expressão gênica da LaNTPDase-1 em Leishmania amazonensis
dc.typeDissertation


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