| dc.contributor | Perales, Jonas Enrique Aguilar | |
| dc.contributor | Domont, Gilberto Barbosa | |
| dc.creator | Jurgilas, Patrícia Barbosa | |
| dc.date | 2019-09-12T19:29:22Z | |
| dc.date | 2019-09-12T19:29:22Z | |
| dc.date | 2004 | |
| dc.date.accessioned | 2023-09-26T22:25:57Z | |
| dc.date.available | 2023-09-26T22:25:57Z | |
| dc.identifier | JURGILAS, Patrícia Barbosa. DM43, um inibidor de metaloproteases de matriz envolvidas em osteoartrite e neoplasias. 2004. 93 f. Tese (Doutorado em Biologia Celular e Molecular)-Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2004. | |
| dc.identifier | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/35568 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8879132 | |
| dc.description | Nosso grupo já vem há muitos anos investigando a resistência natural de animais a venenos de serpentes. Do soro do gambá (Didelphis marsupialis) foi isolada e caracterizada uma glicoproteína ácida de 43kDa (DM43), capaz de inibir as atividades de metaloproteases encontradas nos venenos por formação de complexos não-covalentes (Neves-Ferreira et al., 2000). No atual trabalho, procuramos avaliar se DM43 seria capaz de inibir outras metaloproteases, como as MMPs, que estão envolvidas em diversos processos patológicos, como a osteoartrite e câncer. Utilizamos linhagens celulares normais (3T3-fibroblastos) e tumorais (MDA-adenocarcinoma de próstata e MCF7-adenocarcinoma de mama) e líquido sinovial de pacientes com osteoartrite, como fontes de MMPs As MMPs interagiram com DM43 acoplada a uma coluna de afinidade. Por imunorevelação foram identificadas como MMPs 2, 3 e 9. Em ensaios utilizando a fibronectina e a caseína como substratos, DM43 mostrou-se capaz de inibir a atividade proteolítica destas metaloproteases. O número de células, o ciclo e a morte celular foram analisadas utilizando como tratamento DM43 em 3 diferentes doses (10, 250 e 1000 ng/mL). Nossos resultados demonstraram uma diminuição no número de fibroblastos e de células de adenocarcinoma de mama, utilizando as três doses de tratamento. A análise do ciclo celular não demonstrou alteração, em relação ao controle Portanto, a diminuição de celularidade ocorreu em conseqüência à indução de morte celular nestas linhagens, por via ainda não elucidada. O aumento da morte, em relação ao controle não tratado, foi de pelo menos 2x em fibroblastos e de quase 7x em adenocarcinoma de mama (utilizando a maior dose de DM43). Além disto, verificou-se a capacidade de DM43 inibir a degradação da matriz extracelular produzida por estas enzimas, levando a um intenso depósito de fibronectina, e por conseguinte, um grande aumento de adesão celular. Estes resultados indicam o uso potencial de DM43 na terapia anti-tumoral, bem como, para pacientes com osteoartrite | |
| dc.description | Natural resistance of marsupials against the toxic effects of venoms is due to the presence of soluble neutralizing proteins in their sera. We have isolated from opossum serum (Didelphis marsupialis) an acidic glycoprotein with 43 kDa (DM43), with an effective inhibition action to metalloproteinases snake venoms, by non-covalent complex formation (Neves-Ferreira et al., 2000). In this study, we have been investigating the effect of DM43 against MMPs involved in some pathologic processes, like osteoarthritis and cancer.
In order to test if DM43 is a potential inhibitor of MMPs, we submitted supernatants of stromal cells (3T3), adenocarcinoma cell line (prostate
and breast) and synovial fluid from osteoarthritis to an affinity column coupled with DM43. Bound samples were analyzed on SDS-PAGE and
electrotransferred to a PVDF membrane, which was incubated with antiMMP2, anti-MMP3 or anti-MMP9 monoclonal antibodies. Positive staining was obtained. Enzymes were inhibited by ortophenantroline and DM43, using fibronectin and casein as substrates. Number of cells, cycle and cellular death were carried out on fibroblasts (3T3) and adenocarcinoma (MDA and MCF7) with three doses of DM43 (10, 250 e 1000ng/mL). Our results demonstrated a decrease on 3T3 and MCF7 numbers, using all these DM43 doses. Cell cycle analysis demonstrated no differences in control and DM43 treated cells. The decrease of celularity was promoted by the increase in cellular death by an already unknown pathway. The cellular death on 3T3 and MCF7 was increased 2 and 7x respectively, compared with the control. MDA cell line was not affected by DM43 treatment.
Imunocytochemistry was carried out on 3T3 cells, which were incubated with antibodies raised against ECM (laminin, fibronectin and collagen IV) followed by FITC-conjugated goat anti-rabbit for staining procedure. DM43 in all doses used was able to increase the fibronectin deposition leading to adhesion increase. The inhibition of MMPs activities by DM43 can result on induction of cellular death on stromal and tumoral cells, beyond the deposition of MEC. These results suggest, the use of DM43, as a new candidate for anti-cancer therapy, just like, for patients with osteoarthritis. | |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.language | por | |
| dc.rights | open access | |
| dc.subject | Neoplasias | |
| dc.subject | Osteoartrite | |
| dc.subject | Metaloproteases | |
| dc.title | DM43, um inibidor de metaloproteases de matriz envolvidas em osteoartrite e neoplasias | |
| dc.type | Thesis | |
