Células dendríticas, macrófagos, natural killer e linfócitos t CD8+ desempenham papel fundamental no controle do HSV-1 no gânglio trigêmeo produzindo IL-1 beta, iNOS e granzima B

dc.contributorCampos, Marco Antônio da Silva
dc.contributorMachado, Alexandre de Magalhães Vieira
dc.contributorCampos, Marco Antônio da Silva
dc.contributorSilva, Carlos Eduardo Calzavara
dc.contributorOliveira, Jaquelline Germano de
dc.contributorTrindade, Giliane de Souza
dc.contributorGuedes, Maria Isabel Maldonado Coelho
dc.creatorLucinda, Natália
dc.date2017-07-07T17:52:02Z
dc.date2017-07-07T17:52:02Z
dc.date2017
dc.date.accessioned2023-09-26T22:13:42Z
dc.date.available2023-09-26T22:13:42Z
dc.identifierLUCINDA, Natália. Células dendríticas, macrófagos, natural killer e linfócitos t CD8+ desempenham papel fundamental no controle do HSV-1 no gânglio trigêmeo produzindo IL-1 beta, iNOS e granzima B. 2017. 111 f. Tese (Doutorado em Ciências - Concentração Biologia Celular e Molecular)-Instituto René Rachou, Fundação Oswaldo Cruz, Belo Horizonte, 2017.
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/19773
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8876526
dc.descriptionO Herpes simples tipo 1 (HSV-1) é um vírus neurotrópico que causa sintomas brandos mas também, em alguns casos, cegueira e encefalite. Estudos anteriores demonstraram que a resposta imune contra o HSV-1 ocorre principalmente no gânglio trigêmeo (GT) e que os receptores do tipo Toll 2 e 9 (TLR2/9) são importantes na mediação desta resposta. Adicionalmente, foi evidenciado que a enzima iNOS (óxido nítrico sintase) e a interleucina 1 beta (IL-1β) têm papel essencial na defesa contra a infecção por HSV-1. Assim, o presente trabalho teve como objetivo identificar as principais células responsáveis pela produção de iNOS e IL-1β, bem como, avaliar outras importantes células e moléculas que podem ou não dependerem dos receptores TLR2/9 para mediar a resposta imune contra o HSV-1. Para tanto, camundongos C57BL/6 (selvagens, WT) e TLR2/9-/- foram infectados por via intranasal com 1 x 106 p.f.u. de HSV-1. Para análise das populações de células, suspensões celulares do GT e baço de animais WT e TLR2/9-/-, infectados e não infectados, foram obtidas e analisadas por citometria de fluxo. A porcentagem de células produtoras de iNOS, IL-1β, granzima B e perforina também foi determinada por citometria de fluxo. Os mRNAs das quimiocinas MCP-1 (proteína quimiotática de monócitos 1) e IP-10 (proteína 10 induzida por interferon gama (IFN-γ)) foram quantificados no pulmão e na traqueia por PCR em tempo real. A quimiocina MCP-1 também foi quantificada em nível de proteína, contudo, por Cytometric Bead Array (CBA) no GT, baço, linfonodo e pulmão. As expressões dos transcritos de IL-1β, dos IFNs do tipo I, das interleucinas 5 e 10 (IL-5 e IL- 10) e da granzima B foram quantificados por real time PCR. Os resultados indicam que as células dendríticas (DCs) e os monócitos/macrófagos (Mo/Mɸ) são as principais células produtoras de IL-β e iNOS, respectivamente, e que, junto com os IFNs do tipo I, são essenciais para a resposta imune contra o HSV-1. Além disso, demonstramos que a granzima B produzida por linfócitos T CD8+ e células NK e, as quimiocinas MCP-1 e IP-10 são também importantes para esta resposta imune. Do mesmo modo, nossos dados indicam que os níveis substanciais de MCP-1, IP-10 e granzima B ou são TLR-independentes ou regulados por estes receptores no GT de camundongos TLR2/9-/- infectados. Assim, nossos dados fornecem forte evidência de que as respostas mediadas por DCs, Mo/Mɸ, NK e linfócitos T CD8+ através da produção de IL-1β, iNOS e granzima B, respectivamente, em conjunto com a precoce produção dos IFNs do tipo I no início da infecção, são cruciais para a defesa do hospedeiro contra o HSV-1.
dc.descriptionCAPES
dc.descriptionHerpes simplex virus type 1 (HSV-1) is a neurotropic virus, causing mild symptoms, but also blindness and encephalitis. It was previously shown that the immune response against HSV-1 occurs mainly in the trigeminal ganglia (TG) and that Toll-like receptors 2 and 9 (TLR2/9)are important in mediating this response. Additionally, it was also demonstrated that iNOS (nitric oxide synthase) and interleukin 1 beta (IL-1β) play an essential role in the defense against HSV-1 infection. Importantly, the present work aimed to identify the primary cells responsible for iNOS and IL-1β production and search for other important molecules and cells that might or might not depend on TLR2/9 receptors to mediate the immune response against HSV-1. So, C57BL/6 (wild type, WT) and TLR2/9-/- mice were infected by the intranasal route with HSV-1 (1 x 106 p.f.u.). Cells were obtained from the TG and spleen tissues and the profile of immune cells was determined by flow cytometry in infected and mock infected WT and knockout mice. The percentage of cells producing iNOS, IL-1β, granzyme B and perforin was also determined by flow cytometry. The chemokines MCP1 (monocyte chemoattractant protein-1) and IP-10 (interferon gamma-induced protein 10) transcripts were measured by real time PCR in the trachea and lung. MCP-1 chemokine was also measured at protein level, however, by Cytometric Bead Array (CBA) in the TG, spleen, lymph node and lung. Expression of type I interferons (IFNs), interleukins (IL) 5 and 10, IL-1β and granzyme B were quantified by real time PCR. The results indicate that dendritic cells (DCs) and monocytes/macrophages (Mo/Mφ) were the main sources of IL-1β and iNOS, respectively, which, together with type I IFNs, were essential for the immune response against HSV-1. Additionally, we showed that granzyme B produced by CD8+ T lymphocytes and NK cells and, the chemokines MCP-1 and IP-10 were also important for this immune response. Moreover, our data indicate that the substantial level of MCP-1, IP-10 and granzyme B is either TLR-independent or regulated by these TLRs, in the TG of TLR2/9-/- infected mice. Taken together, our data provide strong evidence that the responses mediated by DCs, Mo/Μφ, NK and CD8+ T lymphocytes through IL-1β, iNOS and granzyme B production, respectively, together with the production of type I IFN early in the infection, are crucial to host defense against HSV-1.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.rightsopen access
dc.subjectHerpes simples tipo 1
dc.subjectImunidade inata
dc.subjectCélulas dendríticas
dc.subjectReceptores do tipo Toll
dc.subjectHerpes simplex virus 1
dc.subjectInnate immunity
dc.subjectDendritic cells
dc.subjectMacrophages
dc.subjectHerpes simples
dc.subjectImunidade Inata
dc.subjectReceptores Toll-Like
dc.titleCélulas dendríticas, macrófagos, natural killer e linfócitos t CD8+ desempenham papel fundamental no controle do HSV-1 no gânglio trigêmeo produzindo IL-1 beta, iNOS e granzima B
dc.typeThesis


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