Participação de leucotrieno B4 na migração e na ativação de linfócitos T γδ

dc.contributorPenido, Carmen
dc.contributorVieira, Joseli Lannes
dc.contributorFigueiredo, Rodrigo Tinoco
dc.contributorMelo, Christianne Bandeira de
dc.contributorSilva, Patricia Pacheco da
dc.contributorSouza, Mariana Conceição de
dc.creatorMartins, Raquel de Souza
dc.date2013-10-03T15:19:32Z
dc.date2013-10-03T15:19:32Z
dc.date2011
dc.date.accessioned2023-09-26T22:13:06Z
dc.date.available2023-09-26T22:13:06Z
dc.identifierMARTINS, Raquel de Souza. Participação de leucotrieno B4 na migração e na ativação de linfócitos T γδ. Rio de Janeiro, 2011. 90 f. : il. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Molecular) Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, 2011.
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/7074
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8876400
dc.descriptionOs linfócitos T γδ desempenham funções importantes na resposta imune contra infecções, na resposta alérgica e na imunidade anti-tumoral. Durante processos inflamatórios, é observado um acúmulo destas células nos tecidos, um fenômeno que acontece em função da migração induzida pela liberação de mediadores quimiotáticos, incluindo a quimiocina CCL2. O leucotrieno (LT) B4 é um mediador lipídico capaz de recrutar linfócitos T αβ e de modular positivamente a produção de CCL2 in vivo e in vitro. Porém, o envolvimento de LTB4 na migração de linfócitos T γδ ainda não havia sido descrito. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi investigar o papel do LTB4 na migração e na ativação de linfócitos T δ de forma direta, ou de forma indireta, via produção de CCL2. Nossos resultados demonstraram que o LTB4 induziu a migração de linfócitos T γδ in vivo e in vitro. Demonstramos que linfócitos T δ expressam o receptor de alta afinidade para o LTB4, o BLT1, e que o LTB4 induziu reorganização no citoesqueleto de linfócitos T γδ isolados. Demonstramos ainda que a resposta inflamatória pleural induzida por LPS levou ao aumento na produção de LTB4 (e de CCL2), o que ocorreu em paralelo ao acúmulo de linfócitos T γδ. A inibição da síntese de LTB4, assim como o bloqueio de BLT1, foi capaz de inibir a migração de linfócitos T γδ in vitro e in vivo em diferentes modelos de pleurisia (induzida por LPS, alérgeno e Mycobacterium bovis BCG). De forma interessante, somente a migração in vivo do subtipo de linfócitos T γδ que expressa a cadeia Vγ4 (mas não as Vγ6.3 ou Vδ4) foi inibido pelo bloqueio de BLT1. Corroborando estes resultados, observamos que os linfócitos T Vγ4 expressam o BLT1, assim como o receptor de CCL2, o CCR2. De acordo, o LTB4 e a CCL2 induziram a quimiotaxia dos linfócitos T Vγ4 in vitro. Entretanto, a injeção i.pl. de LTB4 em camundongos deficientes na expressão de CCR2 induziu o acúmulo de linfócitos T γδ, mas não do subtipo Vγ4, reforçando o papel deste mediador na migração de linfócitos T Vγ4. Ao avaliarmos os parâmetros de ativação dos linfócitos T γδ, observamos que o estímulo in vitro com anticorpo anti-CD3 aumentou os níveis de expressão de BLT1 em células T γδ, indicando que linfócitos T γδ ativados são mais responsivos a LTB4. Entretanto, a adição de LTB4 ao estímulo com anticorpo anti-CD3 induziu apenas um pequeno aumento na proliferação e na produção de IFN- e IL-4 nos linfócitos T γδ (em comparação ao estímulo com anti-CD3). Para avaliar se o LTB4 aumentava a atividade citotóxica dos linfócitos T γδ in vivo, nós utilizamos o modelo murino de metástase pulmonar utilizando a linhagem tumoral B16F10. Nós observamos que, nos pulmões com metástase tumoral, ocorre tanto o acúmulo de linfócitos T γδ quanto a produção de LTB4 e CCL2. Nossos resultados preliminares indicam que a transferência adotiva de linfócitos T γδ previamente estimulados com LTB4 para animais injetados com B16F10 levou à redução da formação de nódulos tumorais nos pulmões. Em conjunto, nossos resultados demonstram que o LTB4 induz a migração de linfócitos T γδ (incluindo o subtipo Vγ4) de forma direta (via BLT1) e indireta (via modulação de CCL2). Ainda, nossos dados sugerem que o LTB4 modula a atividade citotóxica destas células, o que ainda deve ser melhor investigado.
dc.descriptionγδ T lymphocytes play important roles during immune responses to infections, allergy and contribute to tumor immunosurveillence. During inflammatory process, these cells accumulate in the tissues, a phenomena orchestrated by chemotatic mediators, including the chemokine CCL2. LTB4 is a lipid mediator and a known chemoattractant for T αβ; however, until this moment nothing had been described for γδ T lymphocytes. In addition, it had been shown that LTB4 induces CCL2 production, and vice versa. Therefore, the aim of this work was to investigate the role of LTB4 in δ T cell migration and activation, directly or indirectly, via CCL2 production. Our results demonstrate that LTB4 induces γδ T cell migration in vivo and in vitro. We also demonstrated that δ T lymphocytes express the high affinity receptor for LTB4, BLT1, and LTB4 increased polimerazed f-actin levels in isolated γδ T lymphocytes. In addition, we demonstrated that the pleural inflammatory response induced by LPS triggered an increase in LTB4 (and CCL2) production in vivo, what happened in parallel with the accumulation of γδ T lymphocytes. The inhibition of LTB4 synthesis or the BLT1 blockade inhibited γδ T cell migration in vivo in response to different inflammatory stimuli (LPS, allergen and Mycobacterium Bovis BCG), and also in vitro, in a chemotatic assay. Interestingly, only the Vγ4 subtype of γδ T lymphocyte was sensitive to BLT1 blockade in vivo, but the Vδ6.3 and Vγ4 subtypes were not. In vitro, chemoattraction of Vγ4 cells was observed in response to both LTB4 and CCL2. In accordance, Vγ4 lymphocytes express BLT1 and CCR2, a CCL2 receptor. LTB4 intrapleural injection in CCR2 knockout mice caused γδ T cell accumulation in pleural cavities, but not of the Vγ4 subtype. We also investigated activation parameters in γδ T cells, and we observed that the in vitro stimulation with anti-CD3 antibody increased the BLT1 expression T γδ lymphocytes, indicating that activated T γδ cells are more responsive to LTB4. This lipid mediator caused a small augmentation in γδ T cells proliferation, IL-4 and IFN-γ production (when compared with the anti-CD3 stimulation). We also evaluated whether LTB4 could increase the cytotoxicity of γδ T lymphocytes in vivo, utilizing a murine model of pulmonary metastasis using B16F10 tumoral cell line. We observed that γδ T lymphocyte percentage increase in mice lungs after injection of the tumor cell line B16F10 intravenously, which also triggered LTB4 and CCL2 production. Our preliminary results indicate that intratracheal injection of LTB4 preincubated γδ T lymphocytes in B16F10 injected mice decreased the number of tumors in lungs. Taken together, these results demonstrate that γδ T lymphocytes are responsive to LTB4, mainly the Vγ4 subtype, triggering cell migration and, possibly effector functions activation, like cytokine production and citotoxicity.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.publisherInstituto Oswaldo Cruz
dc.rightsrestricted access
dc.subjectLinfócitos T
dc.subjectReceptores do Leucotrieno B4
dc.subjectInflamação
dc.titleParticipação de leucotrieno B4 na migração e na ativação de linfócitos T γδ
dc.typeDissertation


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