Lactococcus lactis produtora de HSP65 como alternativa terapêutica complementar para leishmaniose cutânea causada por leishmania braziliensis

Hsp65-producing lactococcus lactis as a complementary therapeutic alternative for cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis

dc.contributorBrodskyn, Claudia Ida
dc.contributorGuerra, Priscila Valera.
dc.creatorAndrade, Camila Mattos
dc.date2023-05-10T11:52:46Z
dc.date2023-05-10T11:52:46Z
dc.date2022
dc.date.accessioned2023-09-26T21:41:24Z
dc.date.available2023-09-26T21:41:24Z
dc.identifierANDRADE, Camila Mattos. L Lactococcus lactis produtora de HSP65 como alternativa terapêutica complementar para leishmaniose cutânea causada por leishmania braziliensis. 2022. 85f. Dissertação, (Mestrado em Patologia Humana) – Universidade Federal da Bahia, Faculdade de Medicina, Instituto Gonçalo Moniz, Fundação Oswaldo Cruz, Salvador, 2022.
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/58273
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8873257
dc.descriptionINTRODUÇÃO: A leishmaniose é um conjunto de doenças negligenciadas, e uma das suas formas mais frequente no Brasil é a leishmaniose cutânea causada Leishmania braziliensis (L. braziliensis). Esta forma clínica é caracterizada por lesões cutâneas únicas na forma de úlcera com bordas elevadas e fundo necrótico, causada principalmente pela resposta inflamatória exacerbada, induzida por células Th1 produtoras de IFN-γ e apresentando um número reduzido de parasitas no local da lesão. Em modelos de doenças autoimunes e inflamatórias, o uso da indução de tolerância oral (TO) tem se mostrado promissor no desenvolvimento de estratégias terapêuticas, pois os mecanismos regulatórios gerados pela TO diminuem a inflamação causada nestas doenças. Trabalhos da literatura têm mostrado que as Lactococcus lactis (L. lactis), bactérias lácticas, não patogênicas e Gram-positivas são boas ferramentas para a indução da TO. Neste trabalho, utilizamos a cepa recombinante de L. lactis geneticamente modificada produtora da proteína de choque térmico 65 (Hsp65) derivada do Mycobacterium leprae. A Hsp65 possui um papel regulador importante no sistema imune, modulando principalmente respostas inflamatórias devido a sua capacidade de inibir a produção de citocinas, como TNF e IFN-γ, e de aumentar IL-10 pelas células T regulatórias (Tregs). OBJETIVO: Avaliar o potencial terapêutico da administração oral de L. lactis produtoras de Hsp65, como tratamento imunomodulador em modelo experimental de leishmaniose cutânea causada por L. braziliensis em camundongos BALB/c. MÉTODO: Camundongos BALB/c foram desafiados na orelha com promastigotas metacíclicas de L. braziliensis. Após quatro semanas de infecção, os animais foram tratados por via oral com L. lactis produtoras ou não de Hsp65 durante quatro dias consecutivos. Nos diferentes grupos de animais avaliou-se a espessura da lesão, a carga parasitária, citocinas produzidas pelas células dos linfonodos drenantes da lesão e a frequência de células Tregs envolvidas na indução da TO durante todo o período de infecção. RESULTADOS: O acompanhamento semanal da espessura das lesões durante a infecção mostrou que, os animais tratados por via oral com L. lactis produtora de Hsp65 desenvolveu lesões menores e apresentaram uma menor destruição tecidual após o tratamento comparados aos animais dos grupos controles (Lb e Lb/Ø). O tratamento oral com Hsp65 reduziu a carga parasitária a partir de 6 semanas de infecção em relação aos animais que não receberam Hsp65. Foi observado também uma redução na produção de IFN-γ nos linfonodos drenantes da lesão dos animais tratados com Hsp65 seguido de um aumento de IL-10, evidenciando um balanço entre a produção de citocinas pro- e anti-inflamatórias. O tratamento oral com L. lactis produtora de Hsp65 também promoveu o aumento da frequência de células Tregs como CD4+CD25+Foxp3+ e CD4+LAP+ (TGF-β associado à membrana) nos linfonodos drenantes da lesão causada por L. braziliensis. CONCLUSÕES: A utilização da TO utilizando a proteína heteróloga Hsp65 apresenta boas perspectivas para seu emprego no tratamento da leishmaniose cutânea
dc.descriptionCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES). Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).
dc.descriptionINTRODUCTION: Leishmaniasis is a group of neglected diseases, and one of its most frequent forms in Brazil is cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis (L. braziliensis). Unique cutaneous lesions characterize this clinical form as an ulcer with raised edges and necrotic background, mainly driven by an exacerbated inflammatory response induced by IFN-γ-producing Th1 cells and presenting a reduced number of parasites at the lesion site. In models of autoimmune and inflammatory diseases, oral tolerance (OT) induction has shown promise in developing therapeutics, as the regulatory mechanisms generated by OT decrease the inflammation caused by these diseases. Literature studies have demonstrated that Lactococcus lactis (L. lactis), non-pathogenic and Gram-positive lactic bacteria are good tools for the induction. This work used the genetically modified recombinant strain L.lactis producing heat shock protein 65 (Hsp65) derived from Mycobacterium leprae. Hsp65 has an essential regulatory role in the immune system, mainly modulating inflammatory responses due to its ability to inhibit the production of cytokines, such as TNF and IFN-γ, and to increase IL 10 by regulatory T cells (Tregs). OBJECTIVE: To evaluate the therapeutic potential of oral administration of Hsp65-producing L. lactis as an immunomodulatory treatment in an experimental model of cutaneous leishmaniasis caused by L. braziliensis in BALB/c mice. METHOD: BALB/c mice were challenged in the ear with L. braziliensis metacyclic promastigotes. After four weeks of infection, the animals were treated orally with L. lactis producing or not producing Hsp65 for four consecutive days. In the different groups of animals, the thickness of the lesion, the parasite load, cytokines produced by the cells of the lymph nodes draining the lesion and the frequency of Tregs cells involved in the induction of TO during the entire infection period were evaluated. RESULTS: Weekly monitoring of lesion thickness during infection showed that animals treated orally with Hsp65-producing L. lactis developed smaller lesions and showed less tissue destruction after treatment than animals in the control groups(Lb and Lb/Ø). Hsp65-oral treatment reduced the parasite load from 6 weeks of infection compared to those that not receive Hsp65. It was also observed a reduction in that he production of IFN-γ in the lymph nodes draining the lesion of the animals treated with Hsp65 followed by an increase in IL-10, evidencing a balance between the production of pro- and anti inflammatory cytokines. Oral treatment with Hsp65-producing L. lactis also increased the frequency of Treg cells such as CD4+CD25+Foxp3+ and CD4+LAP+ (membrane-associated TGF-β) in the draining lymph nodes of the lesion caused by L. braziliensis. CONCLUSIONS: The use of TO using the heterologous protein Hsp65 presents good prospects for its use in the treatment for leishmaniasis
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.rightsopen access
dc.subjectHsp65
dc.subjectLeishmaniose
dc.subjectLeishmania braziliensis
dc.subjectLactococcus lactis
dc.subjectTolerância oral
dc.subjectHsp65
dc.subjectLeishmaniasis
dc.subjectLeishmania braziliensis
dc.subjectLactococcus lactis
dc.subjectOral tolerance
dc.subjectLeishmaniose
dc.subjectLeishmania Braziliensis
dc.subjectLactococcus Lactis
dc.subjectTolerância
dc.titleLactococcus lactis produtora de HSP65 como alternativa terapêutica complementar para leishmaniose cutânea causada por leishmania braziliensis
dc.titleHsp65-producing lactococcus lactis as a complementary therapeutic alternative for cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis
dc.typeDissertation


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