Domínio D da proteína E2 do vírus chikungunya: aplicabilidade no diagnóstico e produção de anticorpos

dc.contributorDhalia, Rafael
dc.contributorReis, Christian Robson de Souza
dc.contributorDhalia, Rafael
dc.contributorFonseca, Clarice Neuenschwander Lins de Morais
dc.contributorLucena, Antônio Roberto
dc.creatorMonteiro, Tallyta Tâmara da Silva
dc.date2023-04-11T13:46:59Z
dc.date2023-04-11T13:46:59Z
dc.date2020
dc.date.accessioned2023-09-26T20:50:10Z
dc.date.available2023-09-26T20:50:10Z
dc.identifierMONTEIRO, Tallyta Tâmara da Silva. Domínio D da proteína E2 do vírus chikungunya: aplicabilidade no diagnóstico e produção de anticorpos. 2020. 93 p. Dissertação, (mestrado)-Instituto Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2020.
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/57734
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8864732
dc.descriptionAs arboviroses são um grande desafio para a Saúde Pública mundial. O Brasil é considerado alvo de epidemias de arbovírus, devido ao clima tropical e as precárias condições de saneamento que favorecem a proliferação dos vetores. Entre as arboviroses, a Febre Chikungunya (CHIKF) causada pelo Vírus Chikungunya (CHIKV) é transmitida por insetos do gênero Aedes e tem como principais sintomas: febre, dor de cabeça e artralgia. O CHIKV consiste em um nucleocapsídeo e um RNA fita simples que codifica as proteínas virais. Dentre elas a glicoproteína E2, que compõe o envelope, constitui um importante alvo diagnóstico. Esta proteína pode ser dividida em três domínios A, B e C, dos quais o B (DBE2/CHIKV) é considerado um importante determinante imunogênico. Devido à dificuldade do diagnóstico sorológico da CHIKF, por apresentar reações cruzadas com outros arbovírus, neste trabalho propomos a produção de anticorpos policlonais (contra DBE2/CHIKV) para utilizá-los como ferramenta na validação de uma vacina de DNA contra a Chikungunya, assim como avaliar a aplicabilidade desta subunidade proteica no diagnóstico preciso desta virose. A região codificante da subunidade DBE2 foi subclonada em plasmídeos de expressão, para sua produção em sistema procarioto sob a forma de proteínas de fusão com caudas de histidina (His/DBE2). As proteínas obtidas foram utilizadas na imunização de coelhos, para a obtenção de soros hiperimunes contra as mesmas. Os anticorpos policlonais anti-His/DBE2 foram avaliados quanto a sua capacidade de reconhecimento domínio B da proteína E2 do CHIKV. Os anticorpos foram capazes de reconhecer a subunidade recombinante DBE2 tanto em ensaios de ELISA como de western blot, assim como capazes de detectar a expressão da vacina de DNA contra CHIKV. O antígeno His/DBE2 foi em seguida avaliado quanto a sua possível aplicabilidade como antígeno diagnóstico para Chikungunya, através de ensaios de ELISA indireto utilizando amostras sorológicas humanas. Embora a subunidade His/DBE2 tenha apresentado capacidade diagnóstica para a detecção de anticorpos contra CHIKV por ELISA, ainda se faz necessário validar este ensaio.
dc.descriptionArboviruses are a major challenge for public health worldwide. Brazil is considered the target of arbovirus epidemics, due to the tropical climate and the precarious sanitation conditions that favor the proliferation of vectors. Among arboviruses, Chikungunya Fever (CHIKF) caused by the Chikungunya Virus (CHIKV) is transmitted by insects of the genus Aedes and has as main symptoms: fever, headache and arthralgia. CHIKV consists of a nucleocapsid and a single stranded RNA that encodes viral proteins. Among them, the E2 glycoprotein, which makes up the envelope, constitutes an important diagnostic target. This protein can be divided into three domains A, B and C, of which B (DBE2/CHIKV) is considered an important immunogenic determinant. Due to the difficulty of serological diagnosis of CHIKF, for presenting cross reactions with other arboviruses, in this work we propose the production of polyclonal antibodies (against DBE2/CHIKV) to use them as a tool in the validation of a DNA vaccine against Chikungunya, as well as evaluate the applicability of this protein subunit in the accurate diagnosis of this virus. The coding region of the DBE2 subunit was subcloned into expression plasmids, for its production in a prokaryotic system in the form of fusion proteins with histidine tails (His/DBE2). The proteins obtained were used to immunize rabbits, to obtain hyperimmune sera against them. Polyclonal anti-His/DBE2 antibodies were assessed for their ability to recognize the B domain of the CHIKV E2 protein. The antibodies were able to recognize the recombinant DBE2 subunit in both ELISA and western blot assays, as well as capable of detecting the expression of the CHIKV DNA vaccine. The His/DBE2 antigen was then evaluated for its possible applicability as a diagnostic antigen for Chikungunya, through indirect ELISA assays using human serological samples. Although the His/DBE2 subunit has shown diagnostic capacity for the detection of antibodies against CHIKV by ELISA, it is still necessary to validate this assay.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.rightsopen access
dc.subjectVírus Chikungunya
dc.subjectFormação de Anticorpos
dc.subjectProteínas do Envelope Viral
dc.subjectAnticorpos Antivirais
dc.subjectAlphavirus
dc.subjectProteínas Recombinantes
dc.subjectProteínas Virais
dc.subjectVacinas Virais
dc.subjectChikungunya virus
dc.subjectAntibody Formation
dc.subjectViral Envelope Proteins
dc.subjectAntiviral Antibodies
dc.subjectAlphavirus
dc.subjectRecombinant Proteins
dc.subjectViral Proteins
dc.subjectviral vaccines
dc.subjectvirus chikungunya
dc.subjectFormación de anticuerpos
dc.subjectProteínas de envoltura viral
dc.subjectAnticuerpos Antivirales
dc.subjectalfavirus
dc.subjectProteínas recombinantes
dc.subjectProteínas virales
dc.subjectvacunas virales
dc.subjectVirus Chikungunya
dc.subjectFormation d'anticorps
dc.subjectProtéines d'enveloppe virale
dc.subjectAnticorps antiviraux
dc.subjectAlphavirus
dc.subjectProtéines recombinantes
dc.subjectProtéines virales
dc.subjectvaccins viraux
dc.subjectVírus Chikungunyaimunol
dc.subjectFormação de Anticorpos
dc.subjectProteínas do Envelope Viral
dc.subjectAnticorpos Antivirais
dc.subjectAlphavirusimunol
dc.subjectProteínas Recombinantes
dc.subjectProteínas Virais
dc.subjectVacinas Virais
dc.subjectProteínas virais
dc.titleDomínio D da proteína E2 do vírus chikungunya: aplicabilidade no diagnóstico e produção de anticorpos
dc.typeDissertation


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