Efeito da infecção pelo Trypanosoma cruzi e do TNF sobre a ativação de fibroblastos cardíacos in vitro

dc.contributorGarzoni, Luciana Ribeiro
dc.contributorLannes-Vieira, Joseli
dc.contributorSouza, Elen Mello de
dc.contributorSilva, Andrea Alice da
dc.contributorPyrrho, Alexandre dos Santos
dc.contributorCruz, Wagner Baetas da
dc.creatorCoelho, Laura Lacerda
dc.date2016-03-28T12:39:37Z
dc.date2016-04-27T07:30:07Z
dc.date2015
dc.date.accessioned2023-09-26T20:37:09Z
dc.date.available2023-09-26T20:37:09Z
dc.identifierCOELHO, Laura Lacerda. Efeito da infecção pelo Trypanosoma cruzi e do TNF sobre a ativação de fibroblastos cardíacos in vitro. 2015. 107 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Molecular) - Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2015.
dc.identifierhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/13341
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8860688
dc.descriptionA fibrose cardíaca é uma importante manifestação da cardiomiopatia chagásica. O papel dos fibroblastos cardíacos (FCs) nesse processo é pouco estudado. Nesse trabalho investigamos o efeito da infecção pelo Trypanosoma cruzi (cepa Y) e do fator de necrose tumoral (TNF) sobre a ativação de FCs in vitro, visando compreender o papel de FCs ativados no processo de gênese da fibrose cardíaca na infecção chagásica. Os FCs foram obtidos a partir de culturas primárias de células cardíacas de fetos de camundongos Swiss Webster, e sua ativação avaliada através da análise da proliferação, diferenciação destas células em miofibroblastos e a expressão de proteínas de matriz extracelular (ECM) através de imunofluorescência (IF) e Western blotting (WB). A caracterização das culturas foi feita através de análise morfológica e funcional e pela análise da expressão dos marcadores tropomiosina sarcomérica (TS) e receptor de domínio de discoidina 2 (DDR2). No nosso sistema de cultivo, 40% dos FCs foram infectados pelo T. cruzi quando utilizamos uma multiplicidade de infecção (MOI) de 10 e 24h de interação As análises da expressão de alfa actina de músculo liso (\03B1-SMA) por WB, revelaram aumento desta proteína nas culturas infectadas sugerindo diferenciação para miofibroblasto nos tempos de 6h e 24h pós-infecção. As análises de proteínas de ECM revelaram aumento na expressão de fibronectina (FN) após 6h, 24h e 48h de infecção e de laminina (LN) após 6h e 24h, quando comparadas as culturas não infectadas. O tratamento com TNF não estimulou a produção de TNF e NO pelos FCs. TNF também não induziu a diferenciação e a síntese de ECM, porém influenciou o processo de proliferação destas células, revelado pelo aumento de células ki-67+ por IF. Ainda, a citocina reduziu as taxa de infecção dos FCs pelo parasita. Assim, nossos resultados demonstram um efeito da infecção pelo T. cruzi e do TNF sobre a ativação de fibroblastos cardíacos, seja através da indução de diferenciação celular e expressão de proteínas de ECM, ou ainda pela indução de proliferação dos FCs, processos estes que podem contribuir para a gênese da fibrose cardíaca observada na doença de Chagas.
dc.descriptionCardiac fibrosis is an important manifestation of Chagas cardiomyopathy. The involvement of cardiac fibroblasts (CFs) in this process is understudied. Here we investigated the effect of Trypanosoma cruzi infection (Y strain) and tumor necrosis factor (TNF) on CFs in vitro, aiming to understand the role of activated CFs in the process of genesis of cardiac fibrosis in chagasic infection. The CFs were obtained from primary cardiac cell cultures from Swiss Webster mice fetuses, and CFs activation analyzed by proliferation, myofibroblast differentiation and extracellular matrix (E CM) proteins expression, through immunofluorescence (IF) and Western blotting (WB). The characterization of cultures was made through morphological and functional analysis and through analysis of expression of the markers sarcomeric tropomyosin (TS) and di scoidin domain receptor 2 (DDR2). In our culture system, 40% of CFs were infected by T. cruzi using a multiplicity of infection (MOI) of 10 e 24h of interaction. WB analysis of alpha smooth muscle actin (α-SMA) expression revealed increased expression of this protein in T. cruzi - infected CFs suggesting cell differentiation into myofibroblasts at 6h and 24h post infection. ECM proteins analyses revealed increased expression of fibronectin (FN) at 6h, 24h e 48h pos-infection and laminin (LN) at 6h and 24h in T. cruzi-infected cultures compared with non-infected ones. TNF treatment did not stimulate TNF and NO production by CFs. TNF also did not induce differentiation and ECM production by CFs, but influenced the proliferation process of these cells, revealed by increase of ki-67+ cells, through IF. Furthermore, the cytokine decrease the infection rate of CFs by T. cruzi. Therefore, our results demonstrate an effect of T. cruzi infection and TNF on cardiac fibroblasts activation, either through induction of cell differentiation and expression of ECM proteins, or by induction of CFs proliferation, processes which may contribute to the genesis of cardiac fibrosis in Chagas disease.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.rightsopen access
dc.subjectFibrose Cardíaca
dc.subjectTrypanosoma cruzi
dc.subjectDoença de Chagas
dc.subjectFibroblastos Cardíacos
dc.subjectInfecção
dc.subjectDoença de Chagas
dc.subjectFibroblastos
dc.subjectFibrose
dc.subjectFator de Necrose Tumoral alfa
dc.subjectTécnicas In Vitro
dc.titleEfeito da infecção pelo Trypanosoma cruzi e do TNF sobre a ativação de fibroblastos cardíacos in vitro
dc.typeDissertation


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