| dc.identifier | FERREIRA, Rafael Lawson. Avaliação de metodologias clássicas e alternativas para detecção de micoplasmas em culturas celulares utilizadas em ensaios de controle de qualidade de produtos biológicos. 2019. 90f. Tese, (Doutorado)-Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2019. | |
| dc.description | Micoplasma é o nome comumente empregado para descrever os microrganismos da Classe Mollicutes. O uso extensivo de culturas celulares nos últimos anos e sua frequente contaminação por micoplasmas, juntamente com a elucidação de possuírem os menores genomas dentre os organismos de vida livre, tem despertado interesse para essas bactérias e contribuído para revelar um pouco mais sobre sua biologia. Atualmente, dois métodos são recomendados pelas farmacopéias internacionais para a detecção de micoplasmas em produtos biológicos: o cultivo e a cultura de células indicadora. A partir de 2008, métodos alternativos baseados na amplificação de ácidos nucleicos foram incluídos na Farmacopeia Europeia, podendo ser empregados desde que sejam validados. Materiais de referência internacionais estão disponíveis para a avaliação da comparabilidade de métodos para a detecção de micoplasmas, porém seus custos são bastante elevados. O Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde é o Laboratório Nacional de Controle para a análise de produtos biológicos. No entanto, o controle de micoplasmas em produtos biológicos ainda não é preconizado na Farmacopeia Brasileira. Neste estudo foram incorporadas dezoito diferentes cepas de micoplasmas de referência na Coleção de Bactérias de Referência em Vigilância Sanitária, dentre as recomendadas para o controle de produtos biológicos e utilizadas em painéis internacionais para avaliação de métodos alternativos. Todas essas cepas se mostraram aptas em crescer num único meio de cultura alternativo Ensaios moleculares de detecção e identidade, baseados em PCR e sequenciamento foram empregados em 55 diferentes amostras de linhagens celulares cedidas por instituições de pesquisa e ensino da cidade do Rio de Janeiro, demonstrando a contaminação de 76,3% das células analisadas e a prevalência de M. arginini, M. hyorhinis e M. orale. A citometria de fluxo utilizando dois marcadores fluorescentes, CFDA e TOPRO, foi padronizada para aferir a viabilidade de M. gallisepticum e depois avaliada em diferentes espécies de micoplasmas, tendo sido praticada com sucesso em M. hyorhinis, S. citri e parcialmente em A. laidlawii (apenas um marcador). As metodologias de detecção e identificação de micoplasmas utilizadas neste estudo podem ser empregadas diretamente no controle de qualidade de culturas celulares e avaliação da viabilidade de microrganismos por citometria de fluxo, nas áreas de produção de material de referência microbiológico e controle de qualidade de produtos | |
