| dc.contributor | Perales, Jonas | |
| dc.contributor | Domont, Gilberto | |
| dc.creator | Jurgilas, Patrícia Barbosa | |
| dc.date | 2019-10-02T14:13:35Z | |
| dc.date | 2019-10-02T14:13:35Z | |
| dc.date | 2000 | |
| dc.date.accessioned | 2023-09-26T20:08:12Z | |
| dc.date.available | 2023-09-26T20:08:12Z | |
| dc.identifier | JURGILAS, Patrícia Barbosa. PO41, uma anti-hemorragina presente no soro de Philander opossum: isolamento, caracterização e interação com metaloproteases isoladas do veneno de Bothrops jararaca. 2000. 83 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Molecular)-Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2000. | |
| dc.identifier | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/36079 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8849399 | |
| dc.description | Em 1994, Perales e colaboradores isolaram e caracterizaram parcialmente frações antibotrópicas (FAB) do soro de vários marsupiais brasileiros, dentre eles o Didelphis marsupialis (DM) e o Philander opossum (PO). No presente trabalho, objetivamos isolar e caracterizar o fator antihemorrágico de PO. Além disto, para o estudo da capacidade inibitória deste fator sobre metaloproteases, desenvolvemos uma nova metodologia de isolamento destas enzimas, jararagina e botrolisina, a partir do veneno de Bothrops jararaca (BJ). A proteína antihemorrágica isolada foi denominada de PO41, pois apresentou 41,330 u.m.a. por MALDI-TOF. Por filtração em gel verificamos que esta proteína possuía massa molecular de 61,5 kDa e apresentou identidade nos 27 resíduos N-terminais com dois inibidores isolados do soro de DM, DM40 e DM43. Por imunotransferência, obtivemos padrões de mobilidade idênticos quando revelamos PO41 e DM43, com anticorpo policlonal preparado contra a fração antibotrópica de DM. Por focalização isoelétrica estimamos para PO41 ponto isoelétrico abaixo de 3,5. PO41 foi capaz de formar complexos não-covalentes com as enzimas isoladas do veneno de BJ. As atividades proteolíticas e hemorrágicas destas enzimas também foram inibidas por PO41. Nossos resultados sugerem que PO41 é um inibidor de metaloproteases de venenos de serpentes e possui propriedades físico-químicas, estruturais, de imunorreatividade e biológicas similares às dos inibidores pertencentes a superfamília gênica das imunoglobulinas. | |
| dc.description | An antihaemorrhagic factor from Philander opossum serum was isolated and characterizated. In order to study the neutralization effect of this inhibitor, we have developed a new methodology to isolate a PI as well as PIII SVMP from Bothrops jararaca venom (Bjv). The antihaemorrhagic protein was isolated from Philander opossum serum by DEAE-Sephacel, Phenyl Superose and
Superdex 200 chromatographies. The homogenous protein presented a molecular mass of 41,330 amu by MALDI-TOF mass spectrometry and was named PO41. By gel filtration chromatography, we have obtained a molecular mass of 61,5 kDa on native conditions. From Edman sequencing, PO41 and DM43, another SVMP inhibitor, presented similar amino termini through the first 27 residues. Identical immunoblotting patterns were
obtained when both inhibitors were developed with polyclonal antibodies raised against Didelphis marsupialis active serum fraction. Isoeletric points were estimated to be less than 3.5 for both proteins. The new methodology to purify jararhagin (a PIII SVMP) and botrolysin (a PI SVMP) was based on cromatographies using Superdex 200 and Phenyl Superose. Jarahagin was further submitted to a Mono Q column. The proteolytic and haemorrhagic
effects of the haemorrhagins were neutralized by PO41. Both haemorrhagins formed stable complexes with PO41, as observed by gel filtration on Superdex 200. The results suggest that PO41 presents similar physicochemical, structural, immunoreactive and biological properties with the SVMP inhibitors, including DM40 e DM43. These inhibitors belong to the supergene family of immunoglobulins. | |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.language | por | |
| dc.rights | open access | |
| dc.subject | Marsupiais | |
| dc.subject | Metaloproteases | |
| dc.subject | Bothrops | |
| dc.subject | Imunidade inata | |
| dc.title | PO41, uma anti-hemorragina presente no soro de Philander opossum: isolamento, caracterização e interação com metaloproteases isoladas do veneno de Bothrops jararaca | |
| dc.type | Dissertation | |
