Evaluación del estímulo de Porphyromonas gingivalis sobre la integridad celular, respuesta proinflamatoria y producción de péptido Aβ en células endoteliales de microvasculatura de cerebro

Abstract

Antecedentes: Se han demostrado que la enfermedad periodontal puede contribuir y jugar un papel en la etiología, progresión e inflamación de la enfermedad de Alzheimer. La barrera hematoencefálica (BHE) juega un papel importante en el mantenimiento del microambiente especializado del Sistema nervioso central, siendo componente clave, las células endoteliales de microvasculatura de cerebro, por sus características únicas e importantes. Se ha evidenciado que la disfunción de la BHE es un biomarcador temprano de EA. Objetivo: Evaluar el efecto de Porphyromonas gingivalis W83 sobre la respuesta proinflamatoria y la producción y acumulación de péptidos Aβ en células de microvasculatura de cerebro de ratón (MBEC). Métodos: Las MBEC se estimularon con bacteria viva (MOI: 5 -200 y LPS (1.0 -10 µg/ml) de P. gingivalis, se evaluó la viabilidad celular por el método de rezasurina, el efecto sobre el ciclo celular mediante el método 7AAD, la expresión de las moléculas de unión y de adhesión mediante inmunofluorescencia; así mismo, se realizó RT-PCR para determinar la expresión génica de citocinas proinflamatorias finalmente se realizó la medición de la secreción de Aβ42 mediante ELISA. Los datos se expresaron como ±SEM y se analizaron mediante ANOVA de una vía y pruebas post-hoc de Tukey. Un valor de p<0,05 se consideró estadísticamente significativo. Resultados: P. gingivalis a las 48h, indujo cambios en la viabilidad celular a MOI 200: 61.42% y 100: 44.75%; así mismo se observó que tanto la bacteria como el LPS produce modificaciones en el ciclo celular (Fase S). en relación a la las moléculas de unión a MOI: 5 y 100 se presentó cambios en la localización y sobreexpresión de β-catenina y VECAM-1. Así mismo se observó que P.gingivalis aumenta la expresión génica de TNF-α y MCP-1 en las células MBEC e induce la producción de péptidos Aβ a una concentración no mayor de 10 pg/ml. Conclusiones: P.gingivalis indujo disminución en la viabilidad celular, alteraciones en la distribución de las fases del ciclo celular, provoco cambios en el marcaje de las proteínas de unión y adhesión, y aumento en la producción de la expresión de TNF-α y MCP-1 y la producción de péptidos Aβ en las MBEC.