Validación de un método de separación y cuantificación de flavonoides totales por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) con detector UV/Vis en la planta Phytolacca octandra L

Abstract

El presente trabajo tiene como objetivo llevar a cabo la validación de un método de separación y cuantificación de flavonoides totales por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) con detector UV/Vis en la planta Phytolacca octandra L. Para lo cual se llevó a cabo la separación de los flavonoides por técnicas de extracción sólido-líquido (maceración y soxhlet) mediante el uso de solventes polares como etanol y agua, ensayos de los cuales se seleccionó el método de maceración con etanol:agua en proporciones 50:50 gracias al rendimiento observado según la metodología de cuantificación de Folin-Ciocalteu. Posterior a esto se realizó la estandarización de las condiciones que garantizaran una separación óptima de los flavonoides presentes en el extracto, siendo este el sistema cromatográfico de fase reversa compuesto por una fase móvil de Acetonitrilo:Agua (65:35) y una fase estacionaria de tipo C-18 columna Gemini® 50 μm C18 110Å de 150x4,6 mm, a una temperatura de 30°C, flujo isocrático de 0,5 mL/ min, volumen de inyección de 10 μL, y longitud de onda de 230 nm. Bajo estas condiciones se realizó la determinación de los parámetros de linealidad, precisión, reproducibilidad, exactitud, robustez, límite de detección y límite de cuantificación. De ahí y para garantizar la eficiencia en la separación se evaluaron los parámetros cromatográficos de selectividad, factor de capacidad, resolución y número y altura de platos teóricos. Bajo el procedimiento extracción se pudo determinar que la cantidad de flavonoides presentes en el extracto fue de 881 ppm y a partir de la validación del método se concluye que este método un sistema lineal, preciso, reproducible, exacto, con límites de detección y cuantificación de 22,46 ppm y 68,06 ppm respectivamente.