Evaluación del efecto aditivo de bacteriófagos contra Cutibacterium acnes e isotretinoína en un modelo de cultivo celular

Abstract

El acné vulgaris es una enfermedad inflamatoria crónica de la piel, la cual afecta en mayor medida a la población entre 12 y 24 años, aunque puede llegar a afectar a personas de hasta 45 o más años de edad. Esta enfermedad tiene una alta prevalencia, causando diferentes problemas psicológicos y sociales. Actualmente, existen diferentes tratamientos tópicos y orales como los retinoides, los antibióticos, la isotretinoína, entre otros; los cuales han demostrado tener una gran eficacia en el control del acné. No obstante, se ha demostrado que estos presentan desventajas importantes como la aparición de resistencia a los antibióticos por parte del patógeno Cutibacterium acnes y la aparición de efectos secundarios en diferentes sistemas del organismo. Por ende, es necesario la búsqueda de nuevos tratamientos. Una de estas alternativas es el uso de bacteriófagos, los cuales causan la lisis celular del patógeno, reduciendo así su abundancia en los folículos pilosos. No obstante, no logran actuar sobre los otros factores etiológicos del acné. Por lo tanto, en esta investigación se propone generar una nueva alternativa, al usar bacteriófagos con moléculas de isotretinoína unidas a su superficie, con el propósito de generar un tratamiento localizado y dirigido, para reducir los efectos secundarios del medicamento, el cual contaría con actividad antiinflamatoria (isotretinoína) y antimicrobiana (bacteriófagos). Para esto, se emplearon una cepa de C. acnes denominada Pa6 y el bacteriófago PAc2, los cuales fueron aislados en investigaciones previas de pacientes con lesiones de acné. Asimismo, se llevaron a cabo diferentes procesos para seleccionar los blancos y lograr la unión estable de las moléculas de isotretinoína a las proteínas de cápside del bacteriófago, se realizaron ensayos de inocuidad del estos fagos por medio de pruebas de citotoxicidad in vitro en cultivos celulares de queratinocitos y se evaluó la actividad antiinflamatoria por medio de la cuantificación de los niveles de expresión de la IL-1B . Los resultados del análisis bioinformático mostraron que es posible realizar la unión por medio de la formación de enlaces ésteres, gracias al extremo carboxilo del fármaco y a los residuos hidroxilo de las proteínas estructurales del bacteriófago , lo cual se corroboró de manera experimental por medio de espectrofotometría UV (Información que se encuentra en proceso de protección de propiedad intelectual). De igual forma, se determinó que aunque el título viral del bacteriófago decorado disminuye, cambiando de 1.1*1011 UFP/mL a 2.2*105 UFP/mL, este sigue teniendo la capacidad de infectar a la bacteria. En cuanto a los ensayos de inocuidad en el cultivo celular, se realizaron pruebas con el medicamento y el bacteriófago de manera individual y en la formación del complejo, los cuales mostraron que no se afecta la viabilidad de la línea celular. Asimismo, el tratamiento propuesto logra reducir los niveles de expresión de la interloquina proinflamatoria. En conclusión, esta aproximación puede llegar a ser una gran alternativa a las terapias actuales contra el acné, ya que puede llegar a actuar sobre varios de los factores fisiopatológicos que causan la enfermedad y puede generar mayor seguridad para el paciente al reducir los efectos secundarios.