Caracterização fenotípica e molecular de isolados de Klebsiella pneumoniae multirresistentes oriundos de swab retal de vigilância de hospitais de diferentes estados brasileiros

Abstract

Introdução: A disseminação de Klebsiella pneumoniae multirresistentes (MDR) tornou-se um desafio de saúde pública no Brasil. Objetivos: Realizar caracterização fenotípica e molecular de isolados de K. pneumoniae multirresistente recuperados de swabs retais de vigilância no Brasil e desenvolver uma cartilha para divulgação da resistência bacteriana para população. Métodos: A identificação bacteriana foi realizada por técnicas convencionais e a susceptibilidade a antibióticos foi determinada por disco-difusão e E-test. A produção de carbapenemase foi testada com auxílio de bloqueadores enzimáticos. A PCR foi utilizada para investigar genes de resistência e virulência. A tipagem molecular foi realizada por PFGE e MLST e a localização dos genes foi realizada por S1-PFGE e Southern Blot. Resultados: Foram selecionados 126 isolados de K. pneumoniae recuperados de entre 2007-2013 de 10 estados brasileiros e Distrito Federal. A maioria dos isolados foi resistente aos \03B2-lactâmicos (97%) e a vários outros antimicrobianos, porém, suscetível à fosfomicina/trometamol, polimixina B (PMB) e tigeciclina. Cerca de 89% dos isolados foram considerados MDR, 3% eram extensivamente resistentes (XDR); 1% era pan-resistente (PDR) e 7% eram suscetíveis a três ou mais classes antimicrobianas. A produção de carbapenemase foi positiva em 82% dos isolados. Detectamos 82%, 1,6%, 78%, 100% e 93% dos isolados carreando os genes blaKPC, blaOXA-370, blaCTX-M, blaSHV, blaTEM, respectivamente. Entre os isolados produtores de KPC, foram selecionadas 40 estirpes representantes, geradas a partir de cada pulsotipo do PFGE de cada estado para a realização do MLST. Foram encontrados 23 STs, sendo 45% pertencente ao complexo clonal 258 (CC258). Isolados do CC258 foram encontrados em todos os estados e compreenderam 70% dos 102 isolados KPC-positivos. O blaKPC-2 foi associado ao Tn4401b em 76% dos representantes Detectamos ainda a presença concomitante de determinantes de resistência para quinolonas e aminoglicosídeos e genes de virulência comuns à espécie. Dos dez isolados resistentes à PMB, todos exibiram interrupção do gene de mgrB, oito isolados carreavam blaKPC-2 e sete pertenciam ao CC258. O genoma completo de um isolado com perfil XDR pertencente ao CC258 revelou diversos genes adquiridos e mutações associadas à resistência antimicrobiana. Descrevemos a detecção prévia de K. pneumoniae ST17 produtor de OXA-370 no Brasil. Este isolado apresentava o gene blaOXA-370 localizado em um plasmídeo de \224557 kb. Uma cartilha com a temática da resistência antimicrobiana foi confeccionada no estilo \201Cperguntas e respostas\201D e contém linguagem, personagens e ilustrações simplificadas para o entendimento da população em geral. Conclusão: Descrevemos a prevalência de isolados do CC258 carreanso o gene blaKPC-2 associado ao Tn4401b oriundos de amostras de swab retal, com a maioria dos isolados apresentando perfil de MDR e determinantes de resistência para quinolonas e aminoglicosídeos, porém, sem associação de fenótipos de resistência aos perfis de virulência. Destacamos também que a interrupção do regulador mgrB é o principal mecanismo de resistência à PMB. Estimulamos a vigilância para amostras XDR e PDR bem como para outros genes de \03B2-lactamases como blaOXA-370, na perspectiva de uma melhor entendimento do panorama nacional da resistência. Incentivamos a divulgação da temática da resistência bacteriana para a população uma vez que poucos materiais especializados alcançam este público. De maneira geral, este trabalho alerta para a presença de bactérias multirresistentes em nosso país carreando uma variedade de mecanismos associados à resistência de forma silenciosa