Caracterização das interações entre homólogos da proteína de ligação ao poli A (PABP) e proteínas de ligação a mRNAs implicadas na regulação da tradução em tripanosomatídeos

Abstract

Nas células eucarióticas, proteínas de ligação ao poli-A (PABPs) e proteínas de ligação a RNA (RBPs) se associam a mRNAs e a outras proteínas para formar complexos de ribonucleoproteínas (mRNPs) que determinam o destino dos transcritos alvos na célula. Os tripanosomatídeos, protozoários parasitas de importância médica, possuem particularidades quanto à sua regulação gênica que ocorre majoritariamente de forma pós-transcricional, onde as PABPs parecem ter um papel chave. De fato, diferentes propriedades estão associadas aos três homólogos de PABP de tripanosomatídeos e que parecem estar ligadas a ações distintas junto aos mRNAs, destacando a migração das PABP2 e PABP3 para o núcleo quando submetidas a estresse transcricional, algo que não é visto para a PABP1. Essas proteínas, seu impacto na tradução e outros processos associados ao metabolismo dos mRNAs, assim como sua relação com diferentes populações de mRNAs, vêm sendo investigadas nestes protozoários, visando identificar diferenças e semelhanças funcionais entre si e com PABPs de outros organismos mais bem estudados. Este trabalho objetivou contribuir na caracterização da PABP2 e das suas interações com proteínas parceiras de Leishmania infantum, permitindo observar novos aspectos da sua função junto a mRNAs alvos. Para isso, foram obtidas linhagens de L. infantum expressando mutantes da PABP2 após deleção de uma cópia do seu gene nativo (SKO). Foi então avaliada a viabilidade celular da L. infantum expressando estes mutantes. As diferentes linhagens geradas na condição SKO foram usadas na obtenção de lisados citoplasmáticos para a realização de imunoprecipitação (IP). As IPs, em triplicatas, foram submetidas a análise de espectrometria de massas. Os resultados dessa análise permitiram identificar grupos de proteínas parceiras associados a tradução, transcrição, transporte de proteínas e fosforilação permitindo identificar o impacto na sua associação provocada pelas mutações introduzidas na PABP2 de L. infantum. Com a análise dos dados dos parceiros proteicos, foi possível identificar em detalhes regiões responsáveis por interações com proteínas pertencentes a complexos envolvidos em diferentes processos ligados ao metabolismo dos seus mRNAs e controle da expressão gênica. Sendo assim, os resultados deste trabalho contribuíram no entendimento de diferentes interações e suas especificidades permitindo um desenvolvimento futuro de drogas alvo específicas.