Análise do efeito da desnutrição no microambiente tímico de camundongos BALB

Abstract

Camundongos desnutridos e infectados com Leishmania (Leishmania) infantum sofrem drástica atrofia tímica acompanhada de diminuição nos níveis de quimiocinas e citocinas, mas a capacidade migratória de timócitos frente a estímulo quimiotático ex vivo é preservada. Além disso, a análise histopatológica do timo revelou que, enquanto os camundongos bem-nutridos infectados (CPi) mostraram um aumento na zona cortical tímica, os camundongos desnutridos e infectados (LPi) exibiram uma redução significativa da razão córtex:medula. Em conjunto, esses resultados indicam que o microambiente tímico, e não a migração celular per se, está comprometido nesses animais. Para avaliar essa hipótese, analisamos os efeitos da desnutrição em componentes da matriz extracelular tímica e nas subpopulações de timócitos em camundongos BALB/c infectados com L. infantum. Observamos níveis significativamente aumentados de fibronectina, laminina e MMP-10 na região cortical tímica. Visto que essa desregulação pode resultar em, (i) alterações nas subpopulações de timócitos, (ii) defeitos na migração intratímica de timócitos em desenvolvimento e/ou (iii) emigração de células T imaturas para periferia, analisamos por citometria de fluxo as subpopulações de células T no timo e em sangue periférico, avaliamos a presença de células duplo positivas (DP) na região medular tímica e analisamos os níveis de quimiocinas envolvidas com a atração de células T maduras do córtex para a medula (CCL21) e da medula para a periferia (S1P1-S1P). Observamos uma redução no número absoluto de células DP em animais LP e LPi, enquanto na região medular tímica e no sangue periférico desses animais essas células estão aumentadas. Além disso, observamos que os níveis de CCL21 estão reduzidos significativamente em animais desnutridos (LP) e desnutridos e infectados (LPi) devido à desnutrição. Análise imuno-histoquímica revelou um aumento significativo dos níveis de S1P1 no córtex tímico de camundongos desnutridos (LP e LPi) ao passo que os níveis do seu ligante S1P em sangue periférico estavam reduzidos somente nos animais infectados (CPi e LPi). Além disso, observamos que a desnutrição favorece o aumento significativo da carga parasitária no timo em comparação a animais bem nutridos infectados (CPi), e que animais CPi apresentam aumento significativo de células T CD4+ efetoras (CD44+CD62l-) e recém ativadas (CD44+CD62l-CD69+), enquanto animais LPi não exibem esse aumento. Em conjunto, esses resultados sugerem que a desnutrição induz um microambiente tímico disfuncional onde a diferenciação, seleção e maturação de timócitos estão comprometidas e impactariam negativamente na saída de células T maduras para a periferia e no controle da proliferação do parasito em órgãos linfoides secundários como o baço, que de fato apresenta aumento precoce da carga parasitaria, agravando/acelerando os eventos imunopatológicos na leishmaniose visceral em indivíduos desnutridos e resultando, portanto, em formas mais graves da doença