Receptor B1 de cininas modula marcadores moleculares da adipogênese

Abstract

Introdução: O sistema calicreína-cininas tem seus efeitos mediados por dois receptores acoplados à proteína G chamados de B1 e B2. O receptor B1 (B1R) está associado a situações patológicas, contudo, novos achados atribuem funções constitutivas ao B1R, em particular no tecido adiposo branco (TAB). Foi demonstrado que animais nocautes para o B1R (B1KO) são resistentes à obesidade induzida por dieta hiperlipídica. Posteriormente, foi observado que o B1R tem expressão constitutiva no TAB e que esse receptor contribui para a expansão do TAB, mediando uma possível hiperplasia. Com base em tais achados, torna-se importante avaliar se há participação do B1R na adipogênese. Este processo, em um período mais inicial, é caracterizado pela expressão dos fatores de transcrição C/EBP-β e δ e, em outro, mais tardio, caracterizado pela expressão de PPARγ e C/EBP-α. Juntos, PPARγ e C/EBP-α são o principal ponto de controle da diferenciação em adipócito, coordenando o processo por uma ativação cruzada Objetivo: Desta forma, considerando estas informações da literatura científica, neste estudo, objetivamos verificar se o B1R altera o perfil de marcadores moleculares da adipogênese em TAB. Métodos: Para isto, camundongos machos e fêmeas WT e B1KO foram mortos e tiveram seu TAB completamente dissecados e armazenados a -80ºC até a realização das análises experimentais. Os machos eram de 2-3 semanas (filhotes) e 3 meses (adultos) e tiveram seus TAB subcutâneo inguinal (TABsi) e visceral epididimal (TABve) dissecados. As fêmeas eram virgens ou prenhas, foram eutanasiadas no 18º dia após o plug vaginal e apenas o TABv parametrial (TABvp) foi coletado. As principais análises experimentais executadas foram a genotipagem por PCR, a expressão gênica por RT-qPCR e a quantificação de proteínas por Western blotting. Resultados obtidos: Foi observado que os animais B1KOs apresentam grande diminuição da expressão de genes marcadores para a adipogênese (Cebpb, Cebpa, Pparg, Fabp4, Adipoq e Lep). Este fenômeno se repetiu em ambos os momentos do desenvolvimento, sexos e depósitos de TAB analisados. Também foi observado que a quantidade da proteína PPARγ em machos B1KOs adultos, em TABsi e TABve, está diminuída em conformidade com a sua expressão. Porém, a quantidade de FABP4 foi observada aumentada, diferentemente de sua expressão. Conclusões: Tais resultados permitem concluir que o B1R modula os principais marcadores moleculares da adipogênese.

Introduction: The kallikrein-kinin system has its effects mediated by two G protein-coupled receptors called B1 and B2. The B1 receptor (B1R) is associated with pathological situations, however, new findings attribute constitutive functions to B1R and in particular in white adipose tissue (WAT). It has been shown that B1R knockout animals (B1KOs) are resistant to high-fat diet-induced obesity. Subsequently, it was observed that B1R has constitutive expression in WAT and that this receptor contributes to the expansion of the WAT, mediating a possible hyperplasia.. Based on such data, it is important to assess whether B1R participates in adipogenesis. This process, in an earlier period, is characterized by the expression of the transcription factors C/EBP-β and δ and, in another, later period, characterized by the expression of PPARγ and C/EBP-α. Together, PPARγ and C/EBP-α are the main checkpoint of adipocyte differentiation, coordinating the process through cross-activation. Objective: Thus, considering this information from the scientific literature, in this study, we aimed to verify whether B1R alters adipogenesis in WAT. Methods: For this, male and female WT and B1KO mice were euthanized and had their WAT completely dissected and stored at -80ºC until the experimental analyses. Males were 2-3 weeks old (pups) and 3 months old (adults) and had their inguinal subcutaneous (isWAT) and epididymal visceral (evWAT) WAT dissected. The females were virgin or pregnant, euthanized on the 18th day after the vaginal plug and only the parametrial visceral WAT (pvWAT) was collected. The main experimental analyzes performed were genotyping by PCR, gene expression by RT-qPCR, and protein quantification by Western blotting. Results: It was observed that B1KOs animals have a reduced expression of marker genes for adipogenesis (Cebpb, Cebpa, Pparg, Fabp4, Adipoq, and Lep), in both developmental stages, sexes, and WAT deposits analyzed. It was also observed that the amount of PPARγ protein in adult male B1KOs, in isWAT and evWAT, is decreased in line with its decreased expression. However, the amount of FABP4 was decreased. Conclusions: Such results allow us to conclude that the B1R module of the main molecular markers of adipogenesis.