A Influência dos compostos sintéticos derivados de N-acilidrazonas (GPQF-815 e GPQF-817) na liberação das vesículas extracelulares isoladas da forma epimastigota de Trypanosoma cruzi

Abstract

O protozoário Trypanosoma cruzi, responsável pela doença de Chagas, libera espontaneamente Vesículas Extracelulares (EVs). Essas EVs, liberadas pelas formas infectivas do T. cruzi, desempenham um papel na modulação da resposta inflamatória nas células hospedeiras durante a infecção, tanto in vitro quanto in vivo. No entanto, a liberação dessas partículas nas formas epimastigotas do parasito é pouco compreendida na literatura. Assim, o objetivo do trabalho de conclusão do curso foi avaliar os efeitos de dois compostos sintéticos derivados de N-acilidrazonas GPQF-815 e GPQF-817 na liberação de EVs isoladas das formas epimastigotas. Embora as atividades biológicas desses compostos ainda não estejam totalmente determinadas, eles já demonstraram ação anti-príon e antimicrobiana. Utilizou-se formas epimastigotas da cepa Y do T. cruzi, incubando-as com diferentes concentrações dos compostos (250, 125 e 62,5, 31,25, 15,625 e 7,8125 µg/mL) durante 2 h, a 28oC. Em seguida, caracterizou-se as vesículas liberadas em termos de tamanho (nm) e concentração (partículas/mL) por meio da análise por Nanoparticle Tracking Analysis (NTA). Simultaneamente, mensurou-se as proteínas presentes nas EVs utilizando a técnica de Nanodrop e o Método de Bradford. Os resultados mostraram que a concentração e o tamanho das EVs liberadas não foram afetados em nenhuma das concentrações dos compostos avaliados. No entanto, observou-se um aumento na quantidade de proteína das EVs quando os compostos GPQF-815 e GPQF-817 foram utilizados em comparação com o grupo controle. Isso sugere que o número de partículas liberadas não depende da concentração de proteína. Portanto, os compostos GPQF-815 e GPQF-817 podem desempenhar um possível papel regulador na formação de EVs em T. cruzi e, consequentemente, podem ser utilizados para controlar a resposta inflamatória durante a infecção do parasito.

The protozoan Trypanosoma cruzi, responsible for Chagas disease, spontaneously releases Extracellular Vesicles (EVs). These EVs, released by infective forms of T. cruzi, play a role in modulating the inflammatory response in host cells during infection, both in vitro and in vivo. However, the release of EVs in the epimastigote form of the parasite is poorly understood in the literature. To understand the knowledge about the release of EVs in this parasite, the effects of two synthetic compounds derived from N-acylhydrazones, GPQF-815 and GPQF-817, were investigated. Although the biological activities of these compounds are not yet fully determined, they have already been shown to have antiprion and antimicrobial actions. Epimastigotes forms of the T. cruzi Y strain was used and incubated with different concentrations of compounds (250, 125, 62.5, 31.25, 15.625 and 7.8125 µg/mL) for 2 hours at 28°C. Next, the released EVs was characterized in terms of size (nm) and concentration (particle/mL) using Nanoparticle Tracking Analysis (NTA). Simultaneously, we measured the proteins present in EVs using the Nanodrop technique and the Bradford method. The results showed that the concentration and size of the released EVs were not affected by any of the concentrations of the evaluated compounds. However, an increase in the amount of protein in EVs was observed when compounds GPQF-815 and GPQF-817 were used compared to the control group. This suggests that the number of released particles does not depend on protein concentration. Therefore, compounds GPQF-815 and GPQF-817 may play a possible regulatory role in the formation of EVs in T. cruzi and, consequently, may be used to control the inflammatory response during parasite infection.