| dc.description.abstract | O ceratocone é uma doença corneana progressiva, bilateral e assimétrica,
caracterizada por afinamento estromal e subsequente ectasia da córnea central e
paracentral, com protrusão cônica, que provoca astigmatismos irregulares e miopia e
proporciona baixa acuidade visual. As alterações visuais decorrentes desta ectasia
podem ser controladas de diferentes formas, a depender da sua progressão. Neste
contexto, o corneal crosslinking (CXL) permite estabilizar a progressão do ceratocone
em córneas onde não há afinamento severo, utilizando a riboflavina como
fotossensibilizador, seguida de exposição à luz ultravioleta A (UVA), para melhorar a
estabilidade biomecânica e a resistência enzimática da córnea, retardando ou
interrompendo a progressão da condição através da indução de ligações cruzadas no
estroma. Entretanto, alguns estudos têm associado diversas complicações ao método
convencional de CXL, tais como a perda e polimorfismos de queratócitos, perda de
células endoteliais, com danos estruturais e funcionais persistentes, opacificações e
perfurações de córnea, achatamento e ceratite secundária. Portanto, métodos
alternativos para a obtenção de ligações cruzadas no estroma devem ser
considerados, como por exemplo através de oxidorredutases, enzimas que catalisam
reações de oxi-redução formando ligações cruzadas covalentes em proteínas, como
o colágeno. Neste contexto, a enzima lacase surge como um composto natural com
atividade potencial para a promoção de ligações cruzadas em córneas, apresentando,
ao mesmo tempo, efeito citotóxico muito reduzido, e portanto, maior viabilidade de
aplicação. Dessa forma, no presente estudo, obteve-se a enzima lacase por
fermentação do fungo endofítico Xylaria sp., seguida de sua purificação e aplicação
em crosslinking in vitro de córneas de porco de abatedouro. As córneas foram, então,
caracterizadas por resistência à degradação enzimática e perfil de desnaturação
térmica por calorimetria exploratória diferencial (DSC) para avaliar o potencial da
lacase como um método alternativo ao CXL tradicional. Nossos resultados
demonstram que o uso da enzima lacase em combinação com uma molécula fenólica,
a catequina, possui grande potencial na formação de ligações cruzadas in vitro,
reduzindo a taxa de degradação enzimática por colagenase e aumentando a
temperatura de desnaturação em ensaios de DSC. Isoladamente, a lacase produzida
pelo fungo endofítico Xylaria sp., quando comparada à comercial (Sigma-Aldrich),
vii
possui atividade de reticulação inferior. Entretanto, a combinação das lacases e
catequina, apresentou níveis similares de atividade, sem diferenças estatisticamente
significativas entre os grupos, demonstrando que a enzima produzida em nosso
projeto é igualmente funcional à comercial, quando utilizadas concomitantemente à
catequina, e que possui potencial considerável na promoção de ligações cruzadas no
estroma, sendo uma alternativa interessante ao método de CXL. | |
