Comparative validation using quantitative real-time PCR (qPCR) and conventional PCR of bovine semen centrifuged in continuous density gradient

dc.contributorUniversidade Estadual Paulista (UNESP)
dc.creatorResende, M. V.
dc.creatorLucio, A. C.
dc.creatorPerini, A. P.
dc.creatorOliveira, L. Z.
dc.creatorAlmeida, A. O.
dc.creatorAlves, B. C. A.
dc.creatorMoreira-Filho, C. A.
dc.creatorSantos, I. W.
dc.creatorLima, V. F. M. Hossepian de
dc.date2014-05-20T13:15:20Z
dc.date2014-05-20T13:15:20Z
dc.date2011-06-01
dc.date.accessioned2017-04-05T19:30:19Z
dc.date.available2017-04-05T19:30:19Z
dc.identifierArquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. Universidade Federal de Minas Gerais, Escola de Veterinária, v. 63, n. 3, p. 544-551, 2011.
dc.identifier0102-0935
dc.identifierhttp://hdl.handle.net/11449/2503
dc.identifier10.1590/S0102-09352011000300002
dc.identifierS0102-09352011000300002
dc.identifierWOS:000293967600002
dc.identifierS0102-09352011000300002.pdf
dc.identifierhttp://dx.doi.org/10.1590/S0102-09352011000300002
dc.identifier.urihttp://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/852405
dc.descriptionO objetivo do presente estudo foi determinar o enriquecimento de espermatozoides portadores do cromossomo X após a centrifugação em gradiente de densidade contínuo de Percoll ou OptiPrep, utilizando reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) do DNA do espermatozoide e dos embriões bovinos produzidos in vitro resultantes pela PCR convencional. Espermatozoides descongelado foram depositados em gradientes de densidade e os tubos foram centrifugados. Os sobrenadantes foram gentilmente aspirados e os espermatozoides recuperados do fundo dos tubos. As taxas de clivagem e de blastocisto foram determinadas pela produção in vitro de embriões e a PCR foi realizada para a identificação genética do sexo dos embriões. Verificou-se diferença na taxa de blastocistos entre os grupos Percoll e OptiPrep (P<0,05). A porcentagem de embriões de fêmeas nos grupos Percoll e OptiPrep foi de 62,0% e 47,1%, respectivamente. Estes resultados foram confirmados pela qPCR do DNA de espermatozoides e uma subestimação foi observada no grupo do gradiente de densidade de Percoll. Foi possível a sexagem de espermatozoides utilizando uma metodologia simples.
dc.descriptionThe objective of the present study was to determine the sperm enrichment with X-bearing spermatozoa, after one centrifugation in a Percoll or OptiPrep continuous density gradient, using quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) of sperm DNA and resultant in vitro-produced bovine embryos by PCR. Frozen/thawed sperm was layered on density gradients and the tubes were centrifuged. Supernatants were gently aspirated and the sperm recovered from the bottom of the tubes. Cleavage and blastocyst rates were determined through in vitro production of embryos and PCR was performed to identify the embryos' genetic sex. A difference in blastocyst rate was found in the Percoll treatment compared to OptiPrep (P<0.05). The percentage of female embryos in the Percoll and OptiPrep groups was 62.0% and 47.1%, respectively. These results were confirmed by qPCR of spermatozoa DNA and underestimation was seen only in the Percoll group. It was possible to sexing sperm using simple approach.
dc.descriptionFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
dc.languageeng
dc.publisherUniversidade Federal de Minas Gerais (UFMG), Escola de Veterinária
dc.relationArquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.subjectBovine
dc.subjectsperm sexing
dc.subjectcentrifugation
dc.subjectembryo sexing
dc.subjectqPCR
dc.subjectPCR
dc.subjectBovino
dc.subjectsexagem espermatozoides
dc.subjectcentrifugação
dc.subjectsexagem embriões
dc.subjectqPCR
dc.subjectPCR
dc.titleComparative validation using quantitative real-time PCR (qPCR) and conventional PCR of bovine semen centrifuged in continuous density gradient
dc.typeOtro


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