Generación de una línea celular estable para el canal de membrana receptor de potencial transitorio de melastina 8 (TRPM8) en células CHO

Abstract

El canal de membrana receptor de potencial transitorio de melastina 8 (TRPM8), cumple un rol importante en la transducción de la nocicepción en una amplia gama de patologías humanas, razón por la que es un blanco de relevancia para el entendimiento y tratamiento del dolor. Sin embargo, el desarrollo farmacológico inespecífico de reguladores de la función de este canal no ha sido exitosa debido a la aparición de efectos secundarios indeseados. Lo anterior hace necesario la generación de modelos de expresión heteróloga que permitan entender las propiedades fisiológicas del canal TRPM8 y las vías de señalización que lo regulan, para la generación de mejores fármacos. Para tal objetivo, en el presente trabajo se generó una línea de expresión estable del canal TRPM8 a partir de células CHO transfectadas con el plásmido pcDNA3TRPM8. Los resultados obtenidos muestran que para la generación de un clon de células CHO con expresión estable del canal TRPM8 es necesario tratar las células CHO transfectadas con 0.8 mg/mL de geneticina por 6 días antes de la generación de la línea y que para la validación por PCR de la inserción en el ADN genómico es necesario pasajear al menos las células tres veces. A partir de la línea celular de expresión estable generada, es posible hacer el tamizaje de extractos o moléculas que puedan regular el canal TRPM8 y que tengan potencial antinociceptivo.