Los inhibidores de las janus cinansas modifican la composición lipídica de las vesículas extracelulares y afectan diferentes funciones de la respuesta inmunitaria

dc.contributorVasquez Duque, Gloria
dc.contributorRojas López, Mauricio
dc.creatorDaza Zapata, Ana María
dc.date2022-10-14T20:38:45Z
dc.date2022-10-14T20:38:45Z
dc.date2022
dc.date.accessioned2023-08-28T20:20:50Z
dc.date.available2023-08-28T20:20:50Z
dc.identifierhttps://hdl.handle.net/10495/31363
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8477730
dc.descriptionRESUMEN: Antecedentes: los inhibidores de Janus Kinase (JAKi) se utilizan para el tratamiento de malignidades, enfermedades autoinmunes e inmunodeficiencias. Sin embargo, inducen eventos adversos como trombosis, linfocitosis y neutropenia que podrían concordar con la liberación de vesículas extracelulares (VE), estructuras derivadas de la membrana celular que pueden mediar en la comunicación intercelular, ser intermediadores de los efectos de los inhibidores al presentar una composición modificada y modular la respuesta de diferentes componentes de la respuesta inmunitaria. Objetivo: evaluar las interacciones y posibles efectos entre componentes del sistema inmune con las VE derivadas de monocitos y linfocitos inducidas por el tratamiento con Baricitinib e Itacitinib Métodos: Se aislaron VE de monocitos y linfocitos de controles sanos, cultivos U937 y JURKAT tratados o no con concentraciones de JAKi no citotóxicas. Se realizaron ensayos de unión usando sangre total y VE teñidas con CFSE (Carboxyfluorescein succinimidyl ester). Se determinó el estallido respiratorio en neutrófilos tratados con VE autólogas estimulados o no con PMA (Phorbol 12-myristate 13-acetate). Se evaluó el efecto de las VE autólogas en la proliferación y producción de citoquinas por células T por luminex. Se realizó un ensayo de agregometría con plasma rico en plaquetas y VE derivadas de U937, JURKAT, linfocitos y monocitos de controles sanos. Finalmente, se hizo un análisis de ácidos grasos de las VE mediante cromatografía de gases. Resultados: Se establecieron diferencias en tamaño y distribución entre las VE inducidos por U937 y JURKAT; el tratamiento con Itacitinib cambió el tamaño de las VE; sin embargo, el tratamiento con DMSO o Baricitinib no lo hicieron. No hubo diferencias significativas en número ni en la expresión de proteínas asociadas a membrana celular (fenotipo) (CD45, HMGB1, Anexina V, HLA-DR o CD4) entre los tratamientos de las VE derivadas de U937, JURKAT, linfocitos y monocitos. Se encontró una tendencia dos veces mayor a la internalización de las VE derivadas de U937 tratadas con itacitinib en comparación con las VE de control (VE-U-DMSO) en neutrófilos, linfocitos y monocitos. El estallido respiratorio fue más atenuado por la presencia de VE derivadas de monocitos que VE derivados de linfocitos. Se estableció que las VE autólogas derivadas de monocitos tratados con Itacitinib pueden reducir la capacidad de proliferación de las células T por la reducción de IL-2 y CD25 sin diferencias en la expresión del marcador de activación temprana CD69. Se encontró un aumento en la agregación plaquetaria con VE derivadas de linfocitos y monocitos tratados con Itacitinib. Adicionalmente, las VE derivadas de los monocitos contienen más miristato que las VE de los linfocitos. El aumento de ácido araquidónico en las VE inducidas por Itacitinib puede explicar la agregación plaquetaria. Conclusiones: El origen celular y el tratamiento con JAKi del que se derivan las VE modulan el estallido respiratorio de neutrófilos, la proliferación de células T, la agregación plaquetaria y la composición de ácidos grasos. El aumento de la proliferación de células T modulada por VE-L/M-BARI podría explicar la linfocitosis en pacientes tratados con Baricitinib. Contrario a lo esperado, se mostró que las VE disminuyen el estallido respiratorio. El cambio de composición de ácidos grasos en VE-M/L-ITA con un aumento de la proporción de ácido araquidónico podría explicar el evento adverso de trombosis descrito en pacientes tratados con JAKi, es necesario evaluar in vivo la formación de trombos en presencia de las VE derivadas del tratamiento con JAKi.
dc.descriptionABSTRACT: Background: Janus Kinase Inhibitors (JAKi) are used for the treatment of malignancies, autoimmune diseases and immunodeficiencies. However, they induce adverse events such as thrombosis, lymphocytosis and neutropenia that could be consistent with the release of extracellular vesicles (EVs), structures derived from the cell membrane that can mediate intercellular communication, mediate the effects of inhibitors by presenting a modified composition and modulate the response of different components of the immune response. Aim: to evaluate the interactions and possible effects between components of the immune system with the EVs derived from monocytes and lymphocytes induced by treatment with Baricitinib and Itacitinib Methods: EVs were isolated from monocytes and lymphocytes from healthy controls, U937 cultures, and JURKAT treated or not with noncytotoxic concentrations of JAKi. Binding assays were performed using CFSE (Carboxyfluorescein succinimidyl ester)-stained EVs and whole blood. Respiratory burst was determined in neutrophils treated with autologous EVs stimulated or not with PMA (Phorbol 12-myristate 13-acetate). The effect of autologous EVs on T-cell proliferation and cytokine production was evaluated by luminex. An aggregometry assay was performed with platelet-rich plasma and EVs derived from U937, JURKAT, lymphocytes, and monocytes from healthy controls. Finally, an EVs fatty acid analysis was performed by gas chromatography. Results: Differences in size and distribution were established between the VEs induced by U937 and JURKAT; Itacitinib treatment changed the size of EVs; however, treatment with DMSO or Baricitinib did not. There were no significant differences in the number or expression of cell membrane-associated proteins (phenotype) (CD45, HMGB1, Annexin V, HLA-DR, or CD4) between treatments of EVs derived from U937, JURKAT, lymphocytes, and monocytes. A two-fold tendency for internalization of itacitinib-treated U937-derived EVs compared to control EVs (VE-UDMSO) was found in neutrophils, lymphocytes, and monocytes. The respiratory burst was more attenuated by the presence of monocyte-derived EVs than lymphocyte-derived EVs. It was established that autologous EVs derived from monocytes treated with Itacitinib can reduce the proliferation capacity of T cells by reducing IL-2 and CD25 without differences in the expression of the early activation marker CD69. An increase in platelet aggregation was found with VEs derived from lymphocytes and monocytes treated with Itacitinib.
dc.format89
dc.formatapplication/pdf
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dc.languagespa
dc.publisherGrupo de Inmunología Celular e Inmunogenética
dc.publisherMedellín - Colombia
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/closedAccess
dc.rightshttp://purl.org/coar/access_right/c_14cb
dc.rightsDerechos reservados - Está prohibida la reproducción parcial o total de esta publicación
dc.subjectPlatelet aggregation
dc.subjectAgregación plaquetaria
dc.subjectInhibidores de las cinasas janus
dc.subjectJanus kinase inhibitors
dc.subjectRespuesta inmune
dc.subjectImmunity
dc.subjectVesículas extracelulares
dc.subjectExtracellular vesicles
dc.subjectMonocitos
dc.subjectMonocytes
dc.subjectLinfocitos
dc.subjectLymphocytes
dc.subjectBaricitinib
dc.subjectItacitinib
dc.subjectEstallido respiratorio
dc.subjectAgregación plaquetaria
dc.subjectEnsayo de proliferación
dc.subjecthttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D010974
dc.subjecthttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D000075242
dc.subjecthttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D007109
dc.subjecthttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D000067128
dc.subjecthttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D009000
dc.subjecthttps://id.nlm.nih.gov/mesh/D008214
dc.titleLos inhibidores de las janus cinansas modifican la composición lipídica de las vesículas extracelulares y afectan diferentes funciones de la respuesta inmunitaria
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/draft
dc.typehttp://purl.org/coar/resource_type/c_bdcc
dc.typehttps://purl.org/redcol/resource_type/TM
dc.typeTesis/Trabajo de grado - Monografía - Maestría


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