Desarrollo de un poxvirus recombinante que expresa la glicoproteína D del Herpesvirus Bovino-1

Development of a recombinant poxvirus expressing Bovine Herpesvirus-1 glycoprotein D

dc.creatorSáenz Ruiz, Julián
dc.creatorOsorio Benitez, Jorge Emilio
dc.creatorVera, Víctor Julio
dc.date2021-10-06T20:45:13Z
dc.date2021-10-06T20:45:13Z
dc.date2012
dc.date.accessioned2023-08-28T19:34:56Z
dc.date.available2023-08-28T19:34:56Z
dc.identifier0120-548X
dc.identifierhttp://hdl.handle.net/10495/22953
dc.identifier1900-1649
dc.identifierhttps://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/27511
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8464208
dc.descriptionRESUMEN: El herpesvirus bovino-1 (BHV-1) es un virus de genoma DNA perteneciente a la familia Herpesviridae, el cual afecta al bovino en el que provoca un amplio espectro de mani festaciones clínicas y pérdidas económicas. El principal componente inmunogénico de su envoltura es la glicoproteína D (gD), la cual ha sido caracterizada y utilizada como inmunógeno en distintossistemas de expresión. El objetivo de este trabajo fue generar un poxvirusrecombinante (Raccoonpox[RCN]) que expresara una versión truncada de la gD del BHV-1 para ser usado como inmunógeno. Para ello, se amplificó el gen que codifica para la versión truncada de la gD, la cual se clonó en el plásmido de transferencia pTK/ IRES/tpa que posee sitios de homología a la timidinakinasa del poxvirus, un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) y una señal secretoria (tPA), generando el constructo pTK/gD/IRES/tpa. Para generar el RCN recombinante, se tomaron células BSC-1, se in fectaron con una cepa Silvestre del RCN (CDC/V71-I-85A) a un índice de multiplicidad de infección de 0,05 y se transfectaron con el constructo pTK/gD/IRES/tpa; generándose diferentes poblaciones virales con y sin el gen de interés. Para seleccionar los virus recombinantes que expresaban el gen de interés,se realizó una selección de recombinantes negativos para timidina kinasa y positivos para la gD por tres rondas de purificación de placas en monocapas de células RAT-2 las cuales son mutantes para timidina kinasa y en presencia de bromodeoxiuridina. Los virus recombinantes se confirmaron por PCR y secuenciación de nucleótidos y se denominaron RCN-gD
dc.descriptionABSTRACT: Bovine Herpesvirus-1 is a DNA virus belonging to the family Herpesviridae, which affects cattle, causing a wide spectrum of clinical manifestations and economic losses. The main immunogenic component is its envelope glycoprotein D (gD), which has been characterized and used as immunogen in different expression systems. The aim of this work wasto generate a recombinant poxvirus(Raccoonpox[RCN]) expressing a truncated version of BHV-1 gD to be used as a vaccine. To do this, it was amplified the gene for a truncated version of gD which subsequently was cloned in transfer plasmid PTK/IRES/tpa which has homology to sites of poxvirus thymidine kinase, an internal site of ribosome entry (IRES) and a secretory signal (tPA), generating the construct PTK/gD/IRES/tpa. To generate the recombinant RCN, we took BSC-1 cells and we infected with a wild type RCN (CDC/V71-I-85A) at a multiplicity of infection of 0.05, then cells were transfected with the construct PTK/gD/IRES/tpa, generating different viral populations with and without the gene of interest. To select recombinant viruses expressing the gene of interest, we performed a selection of recombinant thymidine kinase negative and positive for gD by three rounds of plaque purification on RAT-2 cells monolayers which are thymidine kinase null and using bromodeoxyuridine. Recombinant viruses were recovered and confirmed by PCR and nucleotide sequencing and so called RCN-gD
dc.descriptionCOL0001262
dc.format14
dc.formatapplication/pdf
dc.formatapplication/pdf
dc.languagespa
dc.publisherUniversidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología
dc.publisherCENTAURO
dc.publisherBogotá, Colombia
dc.relationActa Biolo. Colomb.
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/co/
dc.rightshttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2
dc.rightshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/
dc.subjectBovinos
dc.subjectCattle
dc.subjectVacunas contra Herpesvirus
dc.subjectHerpesvirus Vaccines
dc.subjectClonación molecular
dc.subjectMolecular cloning
dc.subjectRinotraqueitis
dc.subjectRhinotracheitis
dc.subjectVirus
dc.subjectViruses
dc.subjectVectores genéticos
dc.subjectGenetic vectors
dc.subjecthttp://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_8262
dc.subjecthttp://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_27503
dc.subjecthttp://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_16462
dc.subjecthttp://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_27532
dc.titleDesarrollo de un poxvirus recombinante que expresa la glicoproteína D del Herpesvirus Bovino-1
dc.titleDevelopment of a recombinant poxvirus expressing Bovine Herpesvirus-1 glycoprotein D
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/article
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.typehttp://purl.org/coar/resource_type/c_2df8fbb1
dc.typehttps://purl.org/redcol/resource_type/ART
dc.typeArtículo de investigación


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