| dc.description | En el presente trabajo de grado se evaluaron cebadores diseñados por Prieto (2014), para
amplificación de secuencias de citocromo P450 en bacterias que fueron aisladas de biosólidos
(Bacillus badius cepa BS1, Gordonia desulfuricans cepa BS2, Rhodococcus ruber cepa BS4, y
Xanthobacter sp cepa BS4) y suelos contaminados con toxafeno (Pandoraea vervacti cepa CS1,
Pandoraea vervacti cepa CS2 y Sphigonomas histidinilytica cepa CS3).
Para lograr esto, se utilizaron cinco cebadores diseñados en el laboratorio de unidad de
saneamiento y biotecnología ambiental (CL, LCT, CT, LT y CN) y un cebador (A) diseñado con
base en el trabajo realizado por Hyun et al, (1998). Para la optimización de las condiciones de
PCR, primero se evaluaron los seis cebadores con una temperatura de anillamiento de 50ºC,
cuando se presentó amplificación con el tamaño del producto de PCR esperado, se realizó un
gradiente de temperatura de anillamiento entre 50ºC y 69°C. Con el fin de optimizar las
condiciones de PCR, también se utilizaron dos concentraciones de MgCl2 (1,5 y 3 mM).
Los resultados que se obtuvieron en este trabajo, consistieron en la optimización de las
condiciones de PCR para los cebadores CL, A, LCT y CL; Para el cebador A, la optimización se
llevó a cabo con una cepa: Pandoraea vervacti cepa CS1, y presentó amplificación en
Pandoraea vervacti cepa CS2 y Sphigonomas histidinilytica cepa CS3. Los productos de PCR que
fueron amplificados en estas cepas, se clonaron y fueron secuenciados. Los resultados de la
secuenciación de los clones, fueron diversos, arrojaron familias de Citocromo P450, permeasas
de membrana, proteínas anticongelantes tipo III, aspartato-alanina antiporte. Para el cebador CL
(749-803pb) amplifico en Bacillus badius cepa BS1. Con respecto a los cebadores LCT (745-
799pb) y CT (749-803pb), se observó una amplificación en Xanthobacter sp., cepa BS4, pero no
se alcanzó optimizar las condiciones de PCR para estos cebadores.
Aunque no se contaba con un control positivo en este trabajo de grado, se sugiere que la
mayoría de los cebadores tiene una baja especificidad para las regiones del citocromo P450. | |
