bachelorThesis
Identificación de ciclótidos de gloeospermum sphaerocarpum Triana & Planch (violaceae) con actividad inhibitoria de la a-glucosidasa
Autor
Franco Walker, Laura Victoria
Institución
Resumen
Los ciclótidos son minipéptidos que han sido aislados de las familias Rubiaceae, Violaceae y Cucurbitaceae, se caracterizan por tener entre 28 a 37 residuos de aminoácidos asociados a un esqueleto cíclico; poseen tres puentes disulfuro los cuales les confiere una alta estabilidad térmica, química y biológica. Los ciclótidos, intervienen en los mecanismos de defensa de las plantas contra el ataque de microorganismos e insectos; modificando esta propiedad se puede adaptar para otros propósitos como tratar enfermedades que afecten a los seres humanos, constituyendo así nuevas alternativas para el control del cáncer y el VIH, entre otras. Con la realización de este proyecto se pretendió conocer y valorar la biodiversidad de la flora regional, al evaluar y determinar el uso potencial como inhibidores de la enzima a-glucosidasa de los extractos vegetales crudos y de las fracciones aisladas de la especie Gloeospermun sphaerocarpum Triana & Planch (Violaceae). La madera de la especie G. sphaerocarpum fue sometida a extracción por maceración con diclorometano-metanol (1:1). Este extracto fue particionado con agua para obtener el extracto acuoso-alcohólico; el cual se sometió a separaciones cromatográfícas utilizando como soportes Poliamida 6S, SephadexG-10 y Octadesilsilano (C18) para remover taninos, eliminar sales y polisacáridos presentes en las muestras; las fracciones fueron evaluadas por cromatografía de capa delgada (CCD), para evidenciar la presenciaausencia de ciclótidos. Aquellas que fueron positivas por CCD fueron purificadas por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) analítica y preparativa. La presencia de los péptidos fue evidenciada por electroforesis en geles de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio y tricina, así como por cromatografía en capa delgada. Los péptidos obtenidos fueron caracterizados parcialmente por espectrometría de masa, detectándose en una muestra la presencia de 6 ciclótidos y en otra muestra 10, de las cual solo se pudo conocer la elucidación estructural de un solo péptido. Adicionalmente, las fracciones cromatográficas obtenidas de G. sphaerocarpum fueron evaluadas por su capacidad para inhibir la enzima α-glucosidasa, presentando un porcentaje de inhibición de 82.01% a una concentración de 50 μg/mL. The cyclotides are minipeptides that have been isolated mainly from Rubiaceae, Violaceae and Cucurbitaceae families; they have between 28 to 37 amino acid residues in a cyclic skeleton, with three disulfide bridges giving them a high thermical, chemical and biological stability. These compounds are involved in the mechanism of defense of plant against microorganism and insects. They provide new alternatives for diseases control such as cancer and HIV, among others. With the completion of this project sought to know and appreciate the biodiversity of the national flora, identifying potential use as inhibitors of enzyme of the crude plant extracts and isolated cyclotides from the Gloeospermun sphaerocarpum Triana &Planch (Violaceae) specie and Violaceae family. The wood of the plant G. sphaerocarpum was subjected to the extraction by maceration with dichloromethane-methanol (1:1). Then, this extract was partitioned with water to obtain an aqueous-alcoholic extract; this was subjects to chromatographics separation by using polyamide 6S as support for removing tannins and Sephadex® G-10 to remove salts and polysaccharides presents in the samples; cyclotides rich fraction were characterized by thin layer chromatography (TLC). Fraction rich in cyclotide mixtures were subjected to separation by using high performance liquid chromatography (HPLC) analytical and preparative. The presents of peptides was involve in electrophoresis in gel of polyacrylamide whit sodium and trycine, like thin layer chromatography. The gained peptides was characterizared partially whit mass spectrometry, detected one specimen in presence in 6 cyclotides and the other one 10, only one was can know about the elucidation structural of one peptide. Additional of this, the chromatographic fractions obtained of G. sphaerocarpum was capacity evaluated for inhibit the enzyme α-glucosidase, presenting one percentage of inhibition of 82.01% at a concentration of 50 μg/mL.