Tesis
Investigação Sobre os Peptídeos Transferidos para a Casca do Ovo de Callosobruchus maculatus Alimentados com Vicilina de Vigna unguiculata e seu Possível Efeito Antimicrobiano
Autor
Linhares, Ricardo Thomé
Institución
Resumen
TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia. Este trabalho mostra que a vicilina, uma proteína de reserva de
sementes, presente na dieta dos besouros Callosobruchus maculatus
após ser internalizada é processada pelos machos, sendo transferida para
as fêmeas durante a cópula através do fluído seminal como presente
nupcial. Larvas de terceiro estádio foram colocadas para se alimentar em
sementes artificiais. As sementes foram montadas com farinha de Vigna
unguiculata mais 0,5% vicilina marcada FITC ou RITC dentro de
cápsulas de gelatina. Machos que haviam passado pelas dietas foram
separados ainda virgens. Cópulas controladas de fêmeas virgens não
marcadas, retiradas da colônia, com os machos com vicilina marcada
foram realizadas. Em um primeiro momento cada fêmea copulou com
um macho marcado, foi retirada e deixada ovipondo em um frasco
coberto individual contendo sementes. No dia seguinte foi feita uma
segunda cópula com um macho agora com outra marcação, as fêmeas
foram deixadas ovipondo em frascos com sementes. Os ovos foram
coletados após a segunda cópula e montados em lâminas escavadas para
observação em microscópio confocal. As duas marcações foram
observadas na superfície dos ovos mostrando a contribuição de ambos
os machos nos peptídeos depositados sobre os ovos pelas fêmeas,
confirmando que as fêmeas se utilizam dos peptídeos de vicilina
recebidos como presente nupcial de mais de um macho. O cimento dos
ovos foi coletado, as proteínas do cimento separadas por eletroforese e
reconhecidas como sendo vicilina por Western blot. Obtendo uma banda
abaixo do trímero de vicilina similar à vista em trabalhos anteriores,
além de duas bandas das subunidades menores da vicilina reconhecidas
pelos anticorpos anti-vicilina. Os resultados obtidos confirmam que o
hábito poliândrico das fêmeas na espécie, possivelmente contribui para a
defesa dos ovos através do aproveitamento de vicilina e peptidios
antimicrobianos passados como presente nupcial seminal pelos machos. This work shows that the vicilin, a seed storage protein, present in the
diet of the beetle Callosobruchus maculatus after being internalized is
processed by males. It is transfered to the females during mating through
the seminal fluid as a nuptial gift. Third instar larvae were put inside
artificial seeds to feed. The artificial seeds were prepared with Vigna
unguiculata flour FITC or RITC marked vicilin 0,5% inside gelatin
caps. Males that passed through the diets were separated while still
virgin. Controled mating with non-marked virgin females, taken from
the colony, with marked vicilin fed males were done. At a first moment
each female mated with a marked male, they were put in a covered flask
with seeds to lay eggs. The next day a second mating occured, now with
a male with different marking, females were left egglaying in flasks
with seeds. The eggs were collected after the second mating and laid
over glass slides for confocal microscopy. The two markings were
observed in the egg surface showing the contribuition of both males in
the peptides deposited over the eggs laid by the females, confirming that
females use vicilin peptides received as a nuptial gift from more than
one male. The eggs cement was collected, it´s proteins separeted by
electrophoresis and recognized as vicilin by Western blot. A band was
obtained below the vicilin trimer similar to one seen in earlier works, as
well as two bands of vicilin´s smaller subunits recognized by the antivicilin
antibody. The results obtained confirmed that the poliandric habit
of females in this species, possibly contributes to egg defense through
the usage of vicilin and antimicrobial peptides passed as a seminal
nuptial gift by males.