Tesis
Caracterização de uma proteína tirosina fosfatase de Trypanosoma rangeli (TrPTP2)
Autor
Prestes, Elisa Beatriz
Institución
Resumen
TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia. Proteínas tirosina fosfatases (PTP) são enzimas responsáveis pela desfosforilação de resíduos de fosfotirosina cujo papel é essencial no controle de processos como a divisão e a diferenciação celular. Uma vez que estão associadas às distintas etapas do ciclo biológico de tripanosomatídeos e possuem baixa similaridade com PTP humanas, essas proteínas são promissores alvos para o desenvolvimento de medicamentos. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar os níveis e os sítios de expressão da PTP de Trypanosoma rangeli (TrPTP2). Para tanto, o gene da TrPTP2, cujo quadro aberto de leitura possui 987pb e prediz uma proteína de 328 aminoácidos (36kDa), foi amplificado via PCR, clonado e expresso em Escherichia coli utilizando-se o vetor pET-14b. A TrPTP2 recombinante foi purificada e usada para produção de antissoros, os quais foram utilizados em ensaios de Western blot e imunofluorescência indireta. Os ensaios de Western blot revelaram uma banda de aproximadamente 60kDa no extrato protéico total de formas epimastigotas e tripomastigotas de T. rangeli, sendo a massa molecular observada superior à massa esperada possivelmente devido aos sítios para glicosilação observados na sequência aminoacídica deduzida. Ensaios de imunofluorescência apontaram um padrão de localização celular para a TrPTP2 distinto entre as formas epimastigotas e tripomastigotas, estando difusa pela membrana do corpo celular nas primeiras e concentrada na membrana flagelar das formas infectantes.