Aislamiento y caracterización de anticuerpos tipo vNAR neutralizantes de α-latrotoxina en veneno de la araña Latrodectus mactans

Isolation and characterization of vNAR-type neutralizing antibodies from α-latrotoxin in Latrodectus mactans spider venom

dc.contributorAlexei Licea Navarro
dc.creatorJORGE GERARDO ITZAE AVENDAÑO AGUIRRE
dc.date2021
dc.date.accessioned2023-03-16T14:34:02Z
dc.date.available2023-03-16T14:34:02Z
dc.identifierhttp://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/3539
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/6231494
dc.descriptionEl envenenamiento derivado del ataque de arañas, es un acontecimiento que siempre ha preocupado al ser humano. En México, Latrodectus mactans (o viuda negra) es una de las especies de araña de mayor importancia debido a la severidad de los síntomas resultantes de su mordida, pudiendo presentar complicaciones y prevalecer hasta por 3 días. Al cuadro clínico resultante de su mordida, se le conoce como latrodectismo, se caracteriza por ardor en la zona de la herida, calambres musculares, sudoración, vomito, entre otros síntomas. En la actualidad, el antiveneno usado en México para contrarrestar el latrodectismo es Aracmyn Plus®, un faboterápico derivado de suero equino de carácter policlonal. Sin embargo, los avances tecnológicos nos dan la oportunidad de mejorar las terapias actuales, permitiéndonos producir un antiveneno compuesto por anticuerpos recombinantes monoclonales sin la necesidad de inmunizar animales. Los dominios de anticuerpos de tiburón, conocidos como vNAR, presentan ventajas sobre los anticuerpos convencionales, incluyendo un menor tamaño, alta solubilidad y estabilidad química; por lo que en este trabajo se exploró su capacidad como una potencial alternativa al antiveneno actual. A partir de una biblioteca sintética de dominios de anticuerpo vNAR, elaborada en nuestro laboratorio, se propuso encontrar un vNAR por medio de 4 rondas de bioselección, usando como antígeno una fracción contenedora de la toxina efectora (α-LTX) aislada del veneno de Latrodectus mactans, y evaluar el reconocimiento de dicho vNAR mediante un ensayo ELISA. De las 4 rondas de bioselección que se realizaron, se obtuvieron 32 colonias, de las cuales, 4 presentaron un vNAR cuyo CDR3 no contiene un codón de paro y con la misma secuencia de aminoácidos. Se seleccionó uno de estos aleatoriamente, para su expresión y purificación, el cual se denominó aLT32. El ensayo ELISA demostró que aLT32 no reconoce la α-LTX del veneno de Latrodectus mactans.
dc.descriptionThe poison derived from a spider bite, has been an enormous concern maintained by the human being since we became conscious. In Mexico, Latrodectus mactans (or black widow) is one of the most important spider species due to the severity of the symptoms resulting from its bite, which can present complications and last up to 3 days. The clinical picture resulting from its bite is known as latrodectism, characterized by burning in the wound area, muscle cramps, sweating, vomiting, among other symptoms. Currently, the antivenin employed in Mexico to counteract latrodectism is called Aracmyn Plus®, which is a polyclonal faboterapic from horse serum. Nevertheless, technological advances give us the opportunity to improve current therapies, providing us the capacity to produce an antivenin composed of recombinant monoclonal antibodies without the need of immunizing animals. The shark antibody domains, known as vNARs, have shown significant characteristics over conventional antibodies, such as smaller size, high solubility and higher chemical stability; so in this work its capacity as a potential alternative to the current antivenin was explored. From a synthetic library of vNAR antibody domains, elaborated in our laboratory, it was proposed to find a vNAR by means of 4 biopanning rounds, using as antigen a fraction containing the effector toxin isolated from Latrodectus mactans poison, and to evaluate the recognition of this vNAR by means of an ELISA assay. From the 4 rounds of bioselection carried out, 32 colonies were obtained, from which, 4 presented a vNAR whose CDR3 does not contain a stop codon and maintain the same sequence of amino acids. One of them was selected randomly, for its expression and purification, which was called aLT32. The ELISA assay showed that aLT32 does not recognize the α-LTX of Latrodectus mactans venom.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagespa
dc.publisherCICESE
dc.relationcitation:Avendaño Aguirre, J.G.I. 2021. Aislamiento y caracterización de anticuerpos tipo vNAR neutralizantes de α-latrotoxina en veneno de la araña Latrodectus mactans. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 38 pp.
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/Autor/Antiveneno, Latrodectus mactans, viuda negra, latrotoxina, vNAR, biblioteca sintética
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/Autor/Antivenim, Latrodectus mactans, black widow, latrotoxin, vNAR, synthetic library
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/cti/2
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/cti/24
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/cti/2413
dc.subjectinfo:eu-repo/classification/cti/241399
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dc.titleAislamiento y caracterización de anticuerpos tipo vNAR neutralizantes de α-latrotoxina en veneno de la araña Latrodectus mactans
dc.titleIsolation and characterization of vNAR-type neutralizing antibodies from α-latrotoxin in Latrodectus mactans spider venom
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis


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