Producción de Lectinas Tn-Especificas Obtenidas de Salvia Palifolia y Hyptis Mutabilis por Variación Somaclonal Celular

Tn-Specific Lectins Production from Salvia Palifolia and Hyptis Mutabilis by Cellular Somaclonal Variation

dc.creatorFilgueira Duarte, Juan José
dc.creatorPérez, Gerardo
dc.date2013-06-10
dc.date.accessioned2022-12-15T18:15:12Z
dc.date.available2022-12-15T18:15:12Z
dc.identifierhttps://revistas.unimilitar.edu.co/index.php/rfcb/article/view/360
dc.identifier10.18359/rfcb.360
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/5356086
dc.descriptionLectinas obtenidas de diferentes géneros de la familia Lamiaceae que reconocen el antígeno Tn, presente en eritrocitos enzimáticamente modificados y en células cancerosas han sido de especial interés. En este trabajo describimos y comparamos la extracción de lectinas Tn específica de semillas y de células cultivadas in vitro de Salvia palifolia e Hyptis mutabilis. Los somaclones que produjeron lectina fueron cultivado en medio suplementado con 2-4-D y 6-BAP, el esquema de purificación de las lectinas incluyo, extracción con PBS, precipitación con etanol al 75%, intercambio iónico, y cromatografía de afinidad. La actividad de le lectina fue monitoreada por el método de ELISA y aglutinación de eritrocitos modificados enzimáticamente. El ensayo de SDS-PAGE de la lectina de H. mutabilis mostro dos bandas con un Mr de 55 y 51 kDa en contraste con el peso molecular determinado por la técnica de filtración en gel de 82 kDa, la proteína es una glicoproteína con 27.7% de azucares neutros. El ensayo de SDS-PAGE de la lectina de S. palifolia mostro dos bandas de 64 y 58 kDa, mientras que por la técnica de filtración en gel se detectó una única proteína con 77 kDa y con un 23.8% de azucares. Caracterizamos las lectinas Tn-especificas con respecto a su pI, composición de aminoácidos, secuencia N-terminal, y actividad de carbohidratos inhibidoresen-US
dc.descriptionLectinas obtenidas de diferentes géneros de la familia Lamiaceae que reconocen el antígeno Tn, presente en eritrocitos enzimáticamente modificados y en células cancerosas han sido de especial interés. En este trabajo describimos y comparamos la extracción de lectinas Tn específica de semillas y de células cultivadas in vitro de Salvia palifolia e Hyptis mutabilis. Los somaclones que produjeron lectina fueron cultivado en medio suplementado con 2-4-D y 6-BAP, el esquema de purificación de las lectinas incluyo, extracción con PBS, precipitación con etanol al 75%, intercambio iónico, y cromatografía de afinidad. La actividad de le lectina fue monitoreada por el método de ELISA y aglutinación de eritrocitos modificados enzimáticamente. El ensayo de SDS-PAGE de la lectina de H. mutabilis mostro dos bandas con un Mr de 55 y 51 kDa en contraste con el peso molecular determinado por la técnica de filtración en gel de 82 kDa, la proteína es una glicoproteína con 27.7% de azucares neutros. El ensayo de SDS-PAGE de la lectina de S. palifolia mostro dos bandas de 64 y 58 kDa, mientras que por la técnica de filtración en gel se detectó una única proteína con 77 kDa y con un 23.8% de azucares. Caracterizamos las lectinas Tn-especificas con respecto a su pI, composición de aminoácidos, secuencia N-terminal, y actividad de carbohidratos inhibidores.es-ES
dc.formatapplication/pdf
dc.languageeng
dc.publisherUniversidad Militar Nueva Granadaes-ES
dc.relationhttps://revistas.unimilitar.edu.co/index.php/rfcb/article/view/360/151
dc.relation/*ref*/Bird, G.W.G., Wingham, J., 1977. Yet more Salvia agglutinins. Vox Sang. 32, 121-122. 2. Bollag, D., Edelstein, S., Stuart, J., 1991. Isoelectric focusing (IFC). Protein Methods, fourth ed. Wiley Liss, New York, 161-164. 3. Fernandez-Alonso, J.L., Vega,N., Filgueira, J.J., Perez, G., 2003. Lectin prospecting in Colombian Labiatae. A systematic-ecological approach. Biochem. Systematcs and Ecology. 31, 617-633. 4. Dubois, M., Giller, K.A., Hamilton, J.K., Smith, F., 1956. Colorimetric method for determination of sugar and related substances. Anal. Chem. 28, 350-356. 5. Duk, M., lisowska, E., Wu, J.H. Wu, A.M., 1994. The biotin/avidin mediated microtiter plate lectin assay with the use of chemically modified glycoprotein ligand. Anal. Biochem. 221, 266-272. 6. Ghazarian, H., Idoni, B., Oppenheimer, S.B., 2011. A glycobiology review: Carbohydrates, lectins and implications in cancer therapeutics. Acta Histochem. 13(3), 236-47 7. Hirohashi, S., Clausen, H., Yamada, T., Shimosato, Y., Hakomori, S.-I.H., 1985. Blood group A cross-reacting epitope defined by monoclonal antibodies NCC Lu-35 and 81 expressed in cáncer of blood group O or B individuals. Its identifications as Tn antigen. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82, 7039-7043. 8. Hirs, W. and Stein, H. 1956. Peptides obtained by chymotryptic hydrolysis of performic acid oxidixed ribonuclease. J. Biol. Chem. 221, 151-169. 9. Laemmli, U.K. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 227, 680-685. 10. Li, Qian., Anver MR., and Butcher DO. 2009. Resolving conflicting data on expression of the Tn antigen and implications for clinical trials with cancer vaccines. Mol. Cancer Ther. 8, 971-979. 11. Lis, H., Latter, H., Adar, R., Sharon, N. 1988. Isolation of two blood type A and N specific isolectins from Moluccella laevis seeds. FEBS Lett. 233, 191-195. 12. Matsudaira, P., 1987. Sequence from picomole quantities of proteins electroblotted onto polyvinilidene difluoride membranes. J. Biol. Chem. 262, 10035-10038. 13. Medeiros, A., Bianchi, S., Calvete, J., Balter, H., Bay, S., Robles, A., 2000. Biochemical and functional characterization of the Tn-specific lectin from Salvia sclarea seeds. Eur. J. Biochem. 267, 1434-1440. 14. Murashige, T., Skoog, E., 1962. A revised médium for rapid growth and bio-assays with tobacco tissue culture. Plant Physiol. 15, 473-497. 15. Pérez, G., 1984. Isolation and characterization of a lectin from the seeds of Erythrina edulis. Phytochemistry. 23, 1229-1232. 16. Piller, V., Piller, F., Cartron, J. 1986. Isolation and chraracterization of N-acetylgalactosamine specific lectin from Salvia sclarea seeds. J. Biol. Chem. 261, 14069-14075. 17. Robles, A., Medeiros, A., Berois, N., Balter, H.S., Pauwels, E.K., Osinaga, E. 2010. In site interaction evaluation of Tn density by inhibition assays. Nuclear Medicine and Biology. 37, 453-458. 18. Spies, J.R., Chambers, D., 1984. Determination of tryptophan. Anal. Chem. 20, 30-39. 19. Steyermark, B., 1961. Quantitative organic micro analysis, 2nd ed, Academic Press, New York. 188-220. 20. Thurnher, M., Clausen, H., Sharon, N., Berger, E.G., 1993 Use of O-glycosylation defective human lymphoid cell lines and flow cytometry to delineate the specificity of Molucella laevis lectin and monoclonal antibody 5F4 for the Tn antigen (GalNac I-O-Ser/Thr). Immunol. Lett. 36, 239-244. 21. 23. Vega, N., Pérez, G., 2006. Isolation and Characterization of a Salvia bogotensis seed lectin specific for Tn antigen. Phytochemistry. 67, 347-355. 22. 24. Wang, W., Peumans, W.J., Rougé, P., Rossi, C., Proost, P., Chen, J. Van Damme, E.J.M., 2003. Leaves of the Lamiaceae species Glechoma hederacea. Plant J. 33, 293-304. 23. 25. Zor, T., Selinger, Z., 1996. Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity. Anal. Biochem. 236, 302-308.
dc.rightsDerechos de autor 2015 Revista Facultad de Ciencias Básicases-ES
dc.rightshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0es-ES
dc.sourceRevista Facultad de Ciencias Básicas; Vol. 9 No. 1 (2013); 134-141en-US
dc.sourceRevista Facultad de Ciencias Básicas; Vol. 9 Núm. 1 (2013); 134-141es-ES
dc.source2500-5316
dc.source1900-4699
dc.subjectLamiaceaeen-US
dc.subjectSalvia palifoliaen-US
dc.subjectHyptis mutabilisen-US
dc.subjectAntígeno Tnen-US
dc.subjectlectinasen-US
dc.subjectLamiaceaees-ES
dc.subjectSalvia palifoliaes-ES
dc.subjectHyptis mutabilises-ES
dc.subjectTn-antigenes-ES
dc.subjectlectinses-ES
dc.titleProducción de Lectinas Tn-Especificas Obtenidas de Salvia Palifolia y Hyptis Mutabilis por Variación Somaclonal Celularen-US
dc.titleTn-Specific Lectins Production from Salvia Palifolia and Hyptis Mutabilis by Cellular Somaclonal Variationes-ES
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/article
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion


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