| dc.description.abstract | Las infecciones por virus Dengue (DENV) representan la
enfermedad viral transmitida por mosquitos más importante
en términos de morbi-mortalidad. El genoma de DENV es un
ARN de cadena simple con dos regiones no traducibles (UTR,
Untranslated Region
) en los extremos (5 ́UTR y 3 ́UTR) limitando
un marco abierto de lectura (ORF,
Open Reading Frame
). Las
5 ́UTR y 3 ́UTR son determinantes en los mecanismos de
replicación y síntesis de proteínas virales, haciendo de los
mismos blancos potenciales para comprobar regulación y/o
inhibición de tales procesos mediante moléculas antivirales. El
objetivo de la investigación fue amplificar la región 5 ́UTR-C
(
Untranslated Region-Capsid
) del genoma de los cuatro serotipos
de DENV luego de la optimización de la Transcripción Reversa
acoplada a Reacción en Cadena de la Polimerasa (RT-PCR), la
cual podría emplearse para evaluar procesos de traducción viral
en sistemas eucariotas
in vitro
y su inhibición con potenciales
antivirales. Se emplearon cepas de los distintos serotipos virales
(DENV-1, DENV-2, DENV-3 y DENV-4) y se realizaron ensayos
con diferentes concentraciones de los cebadores y de las
enzimas
Taq
polimerasa y Transcriptasa Reversa. Los resultados
indicaron que la mejor reacción se obtuvo con concentraciones
de cebadores de 0,5 μM (DENV-1 y DENV-3), 1 μM (DENV-2)
y 0,75 μM (DENV-4). Las enzimas empleadas mostraron alta
eficiencia a la mínima cantidad evaluada (1,25 U). De acuerdo
a las condiciones especificadas, se obtuvieron productos de la
región 5 ́UTR-C con una reacción de RT-PCR robusta y confiable
para la amplificación de estos productos. | |
