| dc.description | RESUMEN
El colágeno es una de las proteínas más abundantes de la naturaleza, está presente principalmente en mamíferos como fibras para-cristalinas que cumplen funciones estructurales y de soporte, siendo el colágeno de tipo I el más abundante formado por dos cadenas peptídicas α1 idénticas combinadas a una cadena α2. El colágeno forma parte del grupo de proteínas fibrilares junto a la queratina y elastina que se caracterizan por ser moléculas difíciles de degradar. Las enzimas proteolíticas son enzimas que hidrolizan los enlaces peptídicos de las proteínas, las proteasas específicas que catalizan la degradación del colágeno nativo a péptidos de menor tamaño se denominan colagenasas. En la naturaleza hay ciertos microorganismos que producen enzimas colagenolíticas y son capaces de degradar los residuos compuestos por colágeno. Las enzimas colagenolíticas son de interés en la industria farmacéutica y de alimentos principalmente. En este trabajo se aislaron del suelo seis microorganismos, dos de ellos fueron seleccionados como colagenolíticos por su capacidad de crecer en medios suplementados con colágeno como única fuente de carbono y nitrógeno. El primero de ellos presento características similares a los hongos filamentosos, y fue identificado molecularmente amplificando las regiones espaciadoras transcribibles internas (ITS) del AND ribosomal como Neurospora crassa, un hongo filamentoso que produce esporas de color naranja y cuya actividad colagenolítica no había sido reportada antes. El segundo microorganismo capaz de crecer en colágeno desarrollo colonias grises y micelio, en la identificación se amplificó del ADN genómico una región del gen que codifica para la subunidad ribosomal 16S y se identifico como Streptomyces sp. Este último, es un género de gran importancia en procesos industriales por su capacidad de producir compuestos con gran eficiencia, en tal sentido, se caracterizó el crecimiento de Streptomyces sp y la degradación de colágeno. Algunos indicadores como la alcalinización del medio, degradación de fibras completas de colágeno tipo I y un patrón electroforético de degradación a medida que se desarrolla en medios de cultivo, fueron evidencia de la capacidad colagenolítica del microorganismo y de la presencia de posibles actividades proteolíticas asociadas. Para estudiar las actividades proteolíticas se utilizaron zimogramas de gelatina y se identificaron al menos cinco bandas de actividad proteolítica (180, 80, 60, 50 y 18 kDa aproximadamente). Los zimogramas con colágeno permitieron identificar a estas proteasas como colagenasas y se seleccionaron para su caracterización solo dos actividades (180 y 18 kDa). La enzima de 180 kDa resulto ser una metalo-proteasa neutra dependiente de Ca2+, como la mayoría de las colagenasas descritas. Por otra parte, la enzima de 18 kDa, resulto ser una proteasa alcalina no susceptible a la inhibición con EDTA y EGTA, por lo que es necesaria una caracterización mas precisa con otros inhibidores de proteasas. Con este estudio se demuestra el potencial de la cepa colagenolítica de Streptomyces sp, aislada en suelo venezolano, como fuente microbiana de enzimas proteolíticas promisorias para su utilización en la industria farmacéutica y de alimentos. | |
