Generación de una línea celular productora de TNF-α humano

Abstract

El factor de necrosis tumoral (TNF) es una proteína de la superfamilia de las citoquinas, la cual cumple un rol preponderante en la regulación de la inflamación, la inmunidad adaptativa, la apoptosis y la respuesta autoinmune, utilizándose para un sinfín de investigaciones científicas. En este trabajo se busca desarrollar una línea celular recombinante capaz de producir el factor de necrosis tumoral (TNF) humano en forma constitutiva. La línea celular seleccionada fue HEK-293 dado que se contaba con dicha línea en el laboratorio y es una de las más utilizadas para realizar transfecciones estables. Si bien no se logró obtener la línea celular que se estaba buscando (capaz de producir TNF-α), se obtuvo la primera línea celular estable de mamífero generada en el Laboratorio de Biotecnología de la Universidad ORT Uruguay. Esto implica que en este trabajo se puso a punto el procedimiento a realizar para obtener líneas celulares estables de mamífero. La línea celular HEK-293_hC5aR1 fue caracterizada mediante una curva de crecimiento que abarcó 16 días y se comprobó que la tasa de crecimiento no se vio afectada respecto a lo reportado en la bibliografía, incluso tiene un tiempo de división menor al reportado por otros autores. Como resultado se pudo determinar que la línea policlonal presenta expresión de la secuencia codificante (CDS) de interés. La línea monoclonal correspondiente al clon 10 se deberá seguir estudiando para comprobar si es capaz de expresar el CDS analizado. Por último se determinó que el anticuerpo Anti-mC5aR1 PE no es capaz de marcar las células que expresan la proteína hC5aR, por lo tanto la citometría de flujo con este anticuerpo no es una opción viable para el análisis de la expresión de dicha proteína. Se concluye que este trabajo presenta técnicas nuevas muy valiosas para la formación de los estudiantes.