Selección de Bacillus spp. nativos productores de quitinasas aislados de suelos de cultivo de Laredo, Trujillo - Perú, 2017

Abstract

En la presente investigación se evaluó la actividad quitinolítica de Bacillus spp. nativos productores de quitinasas a partir de suelos de cultivo de Laredo, Trujillo-Perú con el objetivo de aislar y seleccionar cultivos puros de Bacillus spp. nativos con mayor capacidad quitinolítica. Mediante la siembra en Agar almidón al 0.1%, se logró aislar 21 cultivos puros de Bacillus spp. nativos. Para la determinación cualitativa de la actividad quitinolítica se preparó agar mínimo de sales que comprende 0.7 g de K2HPO4, 0.5g de MgSO4. 7H2O, 0.3 g de KH2PO4, 0.01g de FeSO4.7H2O, 1.26 g de MnSO4, 0.001g de ZnSO4.7H2O, 20g de agar agar y nanoquitina 0.5% a pH 8.0. Los cultivos fueron reactivados mediante siembra por estría en frascos de 5mL de capacidad con AN a 37ºC por 18-24h. A partir de cultivo joven, se sembró por puntura sobre AMS con nanoquitina al 0.5%, pH 8 a 30ºC por 8 días, la prueba se trabajó por duplicado. 11 de los 21 aislamientos mostraron halo de hidrólisis ≥1 mm después de 8 días a 30ºC, siendo consideradas como productores de quitinasas. Mediante la evaluación cualitativa, se logró seleccionar 3 aislamientos como mejores productores. Los aislamientos seleccionados fueron reactivados en frascos con AN a 37ºC por 18h. A partir de cultivo joven, se prepararon suspensiones con ADE, la turbidez fue equivalente al tubo Nº5 del Nefelómetro de Mac Farland( 15x108UFC/mL).Para la evaluación semicuantitativa de los 3 aislamientos seleccionados, en AMS con nanoquitina al 0.8% se sembraron 20uL de inóculo estandarizado a 2 x 1011 cél /mL, a 30ºC por 21 días. Con la prueba estadística ANOVA se demostró que si hubo diferencia significativa (p <0.05), lo que permite concluir que los 3 aislamientos evaluados no producen la misma cantidad de quitinasas.