Validación de un método por cromatografía líquida de alta resolución para determinar cinco vitaminas hidrosolubles en solución endovenosa inyectable

Abstract

Esta investigación tuvo como objetivo validar un método por cromatografía líquida de alta resolución para determinar cinco vitaminas hidrosolubles (riboflavina 5-fosfato sódica, nicotinamida, piridoxina clorhidrato, pantenol y ácido ascórbico) en solución endovenosa inyectable. Se implementó un sistema cromatográfico en gradiente que empleo como fase móvil metanol y una solución de hexanosulfonato sodico 0,95g/L a pH 2,7; Una columna Purospher Star RP-18e de 150 mm x 4,6 mm x 5 µm acondicionada a 20 °C y a flujo 1,5 mL/min empleando detección de arreglo de diodos a 210 nm e inyectando 10 µL de muestra. Se empleo como diluyente una mezcla de buffer fosfato 0,05 M a pH=3,0: acetonitrilo (90:10). La Precisión Instrumental, de área y tiempo de retención, se encontró dentro del criterio de aceptación (R.S.D. ≤ 2,0%). La metodología fue específica y presento purezas de pico no menores de 0,99, la degradación oxidativa de ácido ascórbico presentó purezas de entre 0,75 a 0,79. El método fue lineal y exacto recuperando entre 98,0% y 102,0% en el rango de concentración propuesto. La precisión obtuvo valores de R.S.D. ≤ 2,0% en la repetibilidad (intra-método) y en la precisión intermedia (intra-laboratorio). Se concluye que los parámetros de validación cumplieron con las especificaciones propuestas para los 5 analitos: riboflavina 5-fosfato sódica, nicotinamida, piridoxina clorhidrato, pantenol y ácido ascórbico, por tanto, la metodología analítica, es adecuado para su uso en las condiciones propuestas.

This research aimed to validate a high-performance liquid chromatography method to determine five water-soluble vitamins (riboflavin 5- sodium phosphate, nicotinamide, pyridoxine hydrochloride, panthenol and ascorbic acid) in injectable intravenous solution. A gradient chromatographic system was implemented using methanol and a 0.95 g/L sodium hexanesulfonate solution at pH 2.7 as the mobile phase; A 150 mm x 4.6 mm x 5 µm Purospher Star RP-18e column conditioned at 20 °C and a flow of 1.5 mL/min using diode array detection at 210 nm and injecting 10 µL of sample. A mixture of 0.05 M phosphate buffer at pH = 3.0: acetonitrile (90:10) was used as diluent. The Instrumental Precision, of area and retention time, was found within the acceptance criteria (R.S.D. ≤ 2.0%). The methodology was specific and presented peak purities not less than 0.99, the oxidative degradation of ascorbic acid presented purities between 0.75 and 0.79. The method was linear and exact, recovering between 98.0% and 102.0% in the proposed concentration range. The precision obtained values of R.S.D. ≤ 2.0% in repeatability (intra-method) and intermediate precision (intra-laboratory). It is concluded that the validation parameters met the proposed specifications for the 5 analytes: riboflavin 5-sodium phosphate, nicotinamide, pyridoxine hydrochloride, panthenol, and ascorbic acid, therefore, the analytical methodology is suitable for use under the proposed conditions.