First isolation and molecular characterization of Ehrlichia canis in Costa Rica, Central America

Abstract

The present study investigated Ehrlichia species in blood samples from dogs suspected of clinical ehrlichiosis, using molecular and isolation techniques in cell culture. From a total of 310 canine blood samples analyzed by 16S rRNA nested PCR, 148 (47.7%) were positive for Ehrlichia canis. DNA from Ehrlichia chaffeensis or Ehrlichia ewingii was not detected in any sample using species-specific primers in separated reactions. Leukocytes from five PCR-positive dogs were inoculated into DH82 cells; successful isolation of E. canis was obtained in four samples. Partial sequence of the dsb gene of eight canine blood samples (including the five samples for in vitro isolation) was obtained by PCR and their analyses through BLAST showed 100% of identity with the corresponding sequence of E. canis in GenBank. This study represents the first molecular diagnosis, isolation, and molecular characterization of E. canis in dogs from Costa Rica.

El presente estudio investigó especies de Ehrlichia en muestras de sangre de perros sospechosos de ehrlichiosis clínica, utilizando técnicas moleculares y de aislamiento en cultivo celular. De un total de 310 muestras de sangre canina analizados por 16S rRNA nested PCR, 148 (47,7%) fueron positivos para Ehrlichia canis. ADN de Ehrlichia chaffeensis o Ehrlichia ewingii no se detectó en ninguna muestra utilizando cebadores específicos de especie en reacciones Se inocularon leucocitos de cinco perros PCR positivos en células DH82; aislamiento exitoso de E. canis se obtuvo en cuatro muestras. Secuencia parcial del gen dsb de ocho muestras de sangre canina (incluidas las cinco muestras para aislamiento in vitro) se obtuvo por PCR y sus análisis por BLAST mostró 100% de identidad con la secuencia correspondiente de E. canis en GenBank. Este estudio representa el primer diagnóstico molecular, aislamiento y caracterización molecular de E. canis en perros de Costa Rica.