Nuevas estrategias para mejorar la eficiencia del semen sexado en producción in vitro de embriones bovinos

Abstract

El objetivo de esta tesis fue el de optimizar el uso de semen sexado en embriones bovinos producidos in vitro (PIVE). Para ello se realizaron tres estudios con el fin de evaluar: diferentes medios de fecundación in vitro (FIV): M199-FERT, fluido oviductal sintético (SOF-FERT) y Tirodes-albúmina-lactato-piruvato (TALP) (Estudio 1); agentes hiperactivadores de la motilidad espermática y tiempos de fecundación (Estudio 2) y mini-coloides de densidad variable (Estudio 3). En el Estudio 1, complejos ovocito-cumulus (COCs) fueron fecundados con semen sexado. Se analizó el clivaje, polispermia, formación de blastocitos, calidad embrionaria y capacidad de eclosionar. Los resultados mostraron que el medio de fecundación afectó la tasa de clivaje, desarrollo embrionario, calidad y capacidad de eclosión. En el Estudio 2, factores hiperactivadores de la motilidad: cafeína (CA), teofilina (TH) y CA + TH fueron testados al igual que la duración de la fecundación (8 hs versus 18 hs). Los factores hiperactivadores de la motilidad afectaron las tasas de clivaje y desarrollo embrionario, mientras que el acortamiento de la fecundación no afectó la producción embrionaria. Finalmente, en el Estudio 3 se analizaron diferentes mini-coloides de densidad continuos y discontinuos. La tasa de recuperación y viabilidad espermática y la calidad seminal se vio afectada por el tipo de mini-coloides de densidad. La mono-capa de densidad continua al 80% y el medio SOF-FERT combinado con CA + TH resultaron ser la mejor combinación para obtener la mayor tasa de recuperación, viabilidad y calidad espermática, tasa de clivaje, desarrollo embrionario, calidad embrionaria y capacidad de eclosión.

The aim of this thesis was to optimize the use of sexed semen in bovine in vitro-derived embryos (PIVE). For this purpose, three studies were carried out to evaluate: different fertilization media, namely M199, synthetic oviductal fluid (SOF) and Tyrode’s albumin–lactate–pyruvate (TALP), (Study 1); sperm motility hyperactivating factors and fertilization length (Study 2) and mini-colloids density layers (Study 3). In Study 1, oocyte-cumulus complexes (COCs) were fertilized with sexed semen. Cleavage, polyspermy, blastocyst formation, embryo quality and hatching ability were analyzed. The results showed that the fertilization medium affected cleavage rate, embryo development, embryo quality and hatching. In Study 2, motility hyperactivating factors: caffeine (CA), theophylline (TH) and CA + TH were tested along with oocyte–sperm coincubation time (8 h versus 18 h). The motility hyperactivating factors affected cleavage and embryo development rates, whereas shortening the fertilization length did not affect embryo production performance. Finally, different continuous and discontinuous density mini-colloids were analyzed in Study 3. Sperm recovery, viability and semen quality were affected by the type of mini-colloid density. The mini single-continuous 80% density layer and SOF-FERT medium combined with CA + TH resulted as the best combination to obtain the highest sperm recovery rate, viability and sperm quality, cleavage, embryo development, embryo quality and hatching rates.