Efeito do TGF-β2 e do TNF-α na cicatrizacao do epitelio pigmentado da retina

Abstract

Neste trabalho determinou-se o efeito do fator de necrose tumoral- alfa (TNF-α) e do fator de transformacao do crescimento beta 2 (TGF-β2) na migracao e proliferacao do epitelio pigmentado da retina (EPR) em um sistema simplificado de cicatrizacao in vitro. Culturas confluentes e subconfluentes do EPR foram desnudadas centralmente e, em seguida, observadas com o TGF-β2 (10ng/mL), TNF-α (10ng/mL) ou meio de cultura, apos 24, 48, 72, 96 horas; em alguns periodos analisaram-se concentracoes diferentes de soro. A migracao das celulas foi analisada por contagem do numero de celulas na area desnuda. A proliferacao foi observada in situ pela contagem da porcentagem de celulas positivas por imunohistoquimica, usando-se o antigeno relacionado a proliferacao Ki-67 na regiao desnuda e na margem da ferida. As culturas confluentes das celulas controle se fecharam em aproximadamente 76 horas, e as subconfluentes em 96 horas. O fechamento da ferida ocorreu principalmente por migracao, contudo a proliferacao foi aumentada apos 24 horas nas celulas migrantes e na margem da ferida. O TNF-α estimulou o fechamento da ferida primariamente por aumentar a migracao apos 24 e 48 horas, ocorrendo pequeno efeito na proliferacao de celulas subconfluentes. Em contraste, o TGF-β2 diminuiu o fechamento da ferida por inibicao da proliferacao celular apos 72 e 96 horas e da migracao apos 48, 72 e 96 horas. O efeito do TNF-α foi mais intenso na presenca de celulas subconfluentes, ao passo que o efeito do TGF-β2 foi maior na presenca de celulas confluentes. A cicatrizacao na regiao desnuda de culturas do EPR ocorreu predominantemente por migracao do EPR, embora a proliferacao tambem estivesse envolvida. A cicatrizacao in vitro do EPR foi estimulada pelo TNF-α e inibida pelo TGF-β2