Avaliacao da multiplicacao e preservacao de celulas germinativas epiteliais do limbo humano em cultura na membrana amniotica

Abstract

Objetivo: Avaliar se as culturas de membrana amniotica com explantes de limbo humano sao eficazes na preservacao e multiplicacao de celulas germinativas epiteliais limbicas. Metodos: O indice de crescimento de celulas na membrana amniotica foi comparado entre explantes derivados do limbo, da cornea periferica e da cornea central humana. Para avaliacao do crescimento das celulas epiteliais do limbo, a cinetica do ciclo celular foi verificada por metodo de marcacao, com o uso de Bromodeoxiuridina (BrdU), durante 1 ou 7 dias. Houve acompanhamento das celulas em cultura convencional, cultura secundaria de fibroblastos 3T3 e em camundongos, seguido de rapido tratamento com forbol 12-miristato 13-acetato (ester forbol). A morfologia epitelial foi analisada utilizando-se laminas histologicas e microscopia eletronica de transmissao, sendo que o fenotipo foi definido por imunocoloracao com anticorpos monoclonais para ceratinas e mucinas Resultados: O indice de, crescimento foi de 0/22 (0 por cento) e de 2/24 (8,3 por cento) para os explantes das corneas central e periferica, respectivamente, porem de 77/80 (96,2 por cento) para os explantes de limbo (p<0,0001). Uma marcacao de 24 horas com BrdU mostrou um indice uniformemente baixo (menos de 5 por cento) em 65 por cento dos explantes de limbo, mas tambem um padrao misto, com areas apresentando um alto indice (mais de 40 por cento) em 35 por cento destes explantes, assim como em 100 por cento dos explantes da cornea periferica. Foi detectado um alto indice de marcacao em 61,5 por cento dos explantes de limbo apos uso continuo de BrdU por 7 dias Entretanto, 38,5 por cento retiveram um baixo indice. Observou-se a presenca de varias celulas marcadas apos 7 dias de uso do BrdU, seguidos por 14 dias de acompanhamento em cultura primaria, ou por 21 dias de acompanhamento apos transferencia para camadas alimentadoras de fibroblastos 3T3. Apos exposicao ao ester forbol por 24 horasa(au)