Especie e tecido-especificidade das Thimet oligopeptidases (EC3.4.24.15 e EC3.4.22.19)

Abstract

A metalo-endooligopeptidase recombinante de testiculo de rato (EC 3.4.24.15 ou EOP 24.15) e a endo-oligopeptidase A de cerebro de coelho ou EOPA (outrora denominada de EC 3.4.22.19) foram comparadas, lado a lado, quanto as suas propriedades fisico-quimicas mais marcantes e quanto a sua especificidade por oligopeptideos. Em relacao a distribuicao tecidual em ratos e coelhos, nao foi possivel estabelecer nenhuma correlacao entre os niveis de atividade enzimatica no citosol e os niveis de RNA mensageiro codificante para a metalo-endooligopeptidase 24.15 (EOP 24.15). Os resultados sugerem que a atividade de metabolizacao de neuropeptideos predominante no citosol, atribuida a metalo-endooligopeptidase 24.15 (EOP 24.15), deva provavelmente ser determinada pela atividade de pelo menos duas enzimas citosolicas distintas, sendo uma predominante no testiculo de ratos (EOP 24.15) e a outra no cerebro e testiculo de coelho, e possivelmente, no cerebro de rato tambem (EOPA). Tanto a EOPA como a EOP 24.15 sao ativadas por DTT e inibidas irreversivelmente por compostos derivados da dinorfina marcados com grupamento SH-reativos, alem de nao serem inibidas por EDTA de forma proporcional a concentracao. Estas enzimas exibem a mesma especificidade frente a uma serie de peptideos bioativos, exceto quanto ao LH-RH e substancia P, que sao hidrolisados apenas pela EOP 24.15. Analisando todos os resultados observados, podemos concluir que e improvavel que a EOP 24.15 de testiculo de rato e a EOPA de cerebro de coelho sejam a mesma proteina, embora devam pertencer a uma mesma familia de oligopeptidases. Visando a determinacao da sequencia primaria da EOPA, o cDNA de uma biblioteca de cerebro de coelho, identificado atraves da selecao com anticorpo policlonal monoespecifico anti-EOPA, foi clonado e sequenciado. A sequencia primaria deduzida deste cDNA apresenta o omotifo tipico das metalo-proteases [HEXXH] , sem ter contudo, homologia significativa com proteases ou oligopeptidases conhecidas, incluindo a EOP 24.15. Por outro lado, foi observado um alto grau de homologia (~ 88% da sequencia num segmento de aproximadamente 400 pb) com a regiao rica em cisteinas, aparentemente envolvida na ligacao de citocinas, presente na proteina ohevino, e que parece exercer um papel importante na facilitacao da migracao dos linfocitos (Springer e cols., 1995). Ainda nao foi possivel expressar a proteina recombinante integra para que a atividade especifica caracteristica da endooligopeptidase A de cerebro de coelho fosse verificada, porem ensaios imunologicos realizados com anticorpos produzidos contra a proteina recombinante parcial e a distribuicao do RNA mensageiro correspondente nos diversos tecidos do coelho sugerem que o cDNA em questao codifica para a endooligopeptidase A, responsavel pela atividade de metabolismo de neuropeptideos no citosol de cerebro de coelho