Produção de anticorpos monoclonais e policlonais anti-adenovírus (HAdV) para fins de aplicação em teste diagnóstico rápido de infecções respiratórias

Abstract

Introdução: Os Adenovírus humanos (HAdVs) compreendem um importante grupo de agentes etiológicos, responsáveis por diversas patologias, em adultos e crianças, tais como: infecções respiratórias, oculares, gastroentéricas e urinárias. Por outro lado, estes vírus podem, também, ser isolados das fezes de pacientes assintomáticos por meses após a infecção. Em indivíduos imunocomprometidos, tais como pacientes com Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS) e transplantados de órgãos, podem causar infecções generalizadas. Os adenovírus humanos representam 5 a 15% dos vírus isolados de crianças menores de 2 anos de idade com síndrome gripal. Objetivos: O trabalho tem como finalidade a produção de anticorpos monoclonais (mAbs) e policlonais anti-adenovírus (HAdV) para serem utilizados em teste diagnóstico rápido de infecções respiratórias. Métodos: A purificação do hexon de adenovírus se deu pela metodologia clássica. O vírus foi replicado em células HEK, ultracentrifugado e por fim , fez-se cromatografia de troca iônica e afinidade. Anticorpos monoclonais foram produzidos pela tecnologia de hibridomas. Anticorpos policlonais foram produzidos em coelho. O teste imunocromatográfico proposto foi padronizado utilizando microesferas e ouro coloidal. Resultados: O hexon de adenovírus foi purificado satisfatorialmente pelos processos de ultracentrifugação e cromatografias. Após a purificação viral, foi efetuada a produção e caracterização dos anticorpos monoclonais anti-hexon. Os mAbs foram específicos para os adenovírus 2,3,5 e 41. A padronização do teste rápido foi suficiente para detectar antígeno de adenovírus (em amostras de lavado nasofaríngeo) com sensibilidade de 100% e especificidade de 85% quando comparado a imunofluorescência direta. Conclusões: O teste imunocromatográfico protótipo foi sensível o suficiente para detectar amostras de adenovírus das espécies B (3) e C (2 e 5) e F (41). Possivelmente, possui o mesmo desempenho de uma imunofluorescência direta e com vantagens de um point of care. Novos ensaios são ainda necessários para confirmação de sua eficiência.

Introduction: Human Adenovirus (HAdVs) comprise an important group of etiological agents responsible for various diseases in adults and children, such as: respiratory, eye, gastroenteric and urinary infections. Moreover, these viruses can also be isolated from feces of asymptomatic patients for months after infection. In immunocompromised individuals, such as patients with Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS) and transplant of organs, can cause widespread infections. Human adenoviruses represent 5-15% of the viruses isolated from children under 2 years of age with flu-like illness. Objectives: The work aims at the production of monoclonal antibodies (mAbs) and polyclonal anti-adenovirus (HAdV) for use in rapid diagnostic testing of respiratory infections. Methods: The purification of adenovirus hexon was by the classical methodology. The virus was replicated in HEK cells, ultracentrifuged and affinity and ion exchange chromatography. Monoclonal antibodies were generated by hybridoma technology. Polyclonal antibodies were raised in rabbit. The proposed immunoassay was standardized using microspheres and colloidal gold. Results: Hexon was purified by chromatography and ultrafiltration processes. After viral purification was effected production and characterization of monoclonal anti-hexon antibodies. MAbs were specific to the adenovirus 2,3,5 and 41. The standardization of the rapid test was sufficient to detect adenovirus (on samples of nasopharyngeal lavage) with a sensitivity of 100% and specificity of 85% when compared to direct immunofluorescence. Conclusions: The prototype immunoassay was sensitive enough to detect adenovirus samples of species B (3) and C (2 and 5) and F (41). Possibly it has the same performance of a direct immunofluorescence and advantages of a point of care. Further tests are needed to confirm its effectiveness.