Produtos genicos do receptor B2 da bradicinina de ratos

Abstract

O gene de receptor B2 bradicinina de rato consiste de 4 exons separados por 3 introns, enquanto que o mesmo gene tem 3 exons separados por 2 introns em humanos e camundongo. Ha evidencias que ocorra splicing alternativo no mRNA que codifica o receptor B2 da bradicinina de rato, dando origem a dois mRNAs de tamanhos diferentes. Uma das especies de mRNA conteria exon 3 e a outra especie nao conteria. Foi proposto que no exon 3 estaria um codon de inicio de traducao, sendo assim estes mRNAs que contem ou nao o exon 3 determinariam proteinas de tamanhos de diferentes. Foi encontrado somente uma forma de de mRNA poliadenilado maduro para o receptor B2 da BK em varios tecidos de ratos, pois so foi possivel de amplificar o fragmento que contem exon 3 a partir de RNA total. Foram realizadas reacoes de RT-PCR utilizando cDNA obtidos, da trancriptase reversa de RNA total ou mRNA purificado com primer randomico ou poli-T com os pares de primers dirigidos aos exon 1 e 4, exon 2 e 4, exon 3 e 4 e lntron 2 e exon 4, respectivamente. Obteve-se dois produtos de amplificacao com os primers dirigidos aos exon-exon e um produto para o par de primers dirigidos ao intron-exon. Os produtos maiores da RT-PCR com os pares de primers P1,P2, e P4 contem exon 3 e o produto com o par de primers P3 contem o intron e exon 3. Por outro lado, reacoes de amplificacoes com cDNA proveniente de transcriptase reversa de RNA total ou mRNA purificado, com primer de poli-T, com os pares de primers P1 e P2 apresentaram um produto de amplificacao enquanto que P3 e P4 nao produziram produtos de amplificacao .0 sequenciamento dos produtos de PCR com primesP1 mostrou que o produto maior possui o exon 3 como postularam, enquanto que o produto menor nao tem. Os presente resultados mostram que: i Em tecidos provenientes de tres cepas diferentes de ratos, o exon 3 nao observado em nenhum mRNA maduro que codifica o receptor BK2 de rato. ii. O produto de PCR maior e aparentemente derivado da amplificacao de mRNA processado. Assim spllclng alternativo do mRNA nao foi observado nas experiencias de presentes. iii. Nao esta claro como o exon 3 e removido, se e no passo final do processamento do mRNA do receptor B2 da BK de rato ou antes da poliadenilacao. O splicing alternativo resulta na retirada do exon3 junto com intron 2 ou 3 em uma das especies de mRNA. iv. O fato de que em nenhum mRNA poliadenilado de todos os tecidos examinados de diferentes cepas de..(au)