Dissertação
Produção de Anticorpos Monoclonais para o Norovírus Humano
Fecha
2013-08-14Autor
Oliveira, Nayara de Sá
Oliveira, Nayara de Sá
Institución
Resumen
O Norovírus (NoV), considerado uma das maiores causas de gastrenterite aguda
não-bacteriana, é um vírus eliminado em pouca quantidade nas fezes e não
cultivável em células, o que dificulta a obtenção de antígeno para produção de
anticorpos monoclonais (AcM). Este trabalho propõe a obtenção desse antígeno
diretamente de fezes, com uma metodologia de semi-purificação viral, através de
filtrações esterilizantes e precipitação com polietileno glicol (PEG). O NoV
precipitado com PEG manteve a sua antigenicidade, oferecendo excelentes
condições para a produção e obtenção de seis AcM. Os AcM foram caracterizados
pela técnica de Western Blot, onde foi demonstrada uma forte reatividade com uma
banda de 60KDa, compatível com a proteína viral VP1, principal proteína que forma
o capsídeo. Os AcM também foram capazes de detectar o vírus em amostras fecais
coletadas de pacientes com gastrenterite aguda, utilizando-se a técnica de Dot-blot.
O Dot-blot, quando comparado ao RT-PCR, padrão ouro para o diagnóstico do NoV,
apresentou uma sensibilidade de 74% e especificidade de 47%. Este trabalho
demonstra que os AcM reagiram fortemente com a proteína viral VP1 e que podem
ser úteis na detecção do NoV nas fezes através da técnica de Dot-blot. Novos
estudos devem ser realizados para verificar o potencial uso desses AcM para o
diagnóstico do NoV.