Efeito do benzonidazol sobre as células mononucleares submetidas à infecção in vitro com uma cepa de trypanosoma cruzi resistente ao tratamento

dc.contributorLORENA, Virginia Maria Barros de
dc.contributorMORAIS, Clarice Neuenschwander Lins de
dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/9596460975655394
dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/6242933635724255
dc.creatorMOREIRA, Leyllane Rafael
dc.date2019-04-25T22:22:42Z
dc.date2019-04-25T22:22:42Z
dc.date2018-02-16
dc.date.accessioned2022-10-06T19:00:24Z
dc.date.available2022-10-06T19:00:24Z
dc.identifierhttps://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30333
dc.identifier.urihttp://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/3992258
dc.descriptionO fármaco preconizado para o tratamento da doença no Brasil é o benzonidazol (Bz) e atualmente sua utilização na fase crônica da doença de Chagas tem por finalidade prevenir ou retardar a evolução da doença para formas clínicas mais graves. Acreditamos que o sucesso do tratamento dependa do sinergismo entre a ação tripanocida do Bz e a resposta imune do hospedeiro, Nosso estudo avaliou as células mononucleares do sangue periférico (PBMC) infectadas in vitro com uma cepa de Trypanosoma cruzi que tem resistência ao Bz, a cepa colombiana (CCol), e adição do tratamento com Bz. O sangue de indivíduos voluntários não portadores da doença (n=11) foi coletado em sistema à vácuo em tubos contendo heparina sódica. As células mononucleares foram separadas através de centrifugação em gradiente de densidade por Ficoll Hypaque PLUSᵀᴹ. As PBMCs foram depositadas em placas de 48 poços (1 x 10⁶ células/mL) para adesão das células aderentes/ monócitos por 1h. Em seguida, as células não aderentes (linfócitos) foram removidas e reservadas. e os tripomastigotas da CCol foram adicionados (2,5 x 10⁵ parasitas/ poço) durante 2h. Os parasitas que não se interiorizaram foram removidos por lavagem e por fim,os linfócitos foram readicionados e o tratamento com Bz foi adicionado. Os co-cultivos foram incubados por 24h, 5 e 10 dias. Os sobrenadantes de cultura foram estocados a -20°C para a dosagem de citocinas (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ e TNF) por cytometric beads array (CBA), e com as células do co-cultivo, foi realizada a imunofenotipagem para as moléculas CD28⁺ e CTLA-4⁺ em linfócitos CD4⁺ e CD8⁺, e CD80⁺, CD86⁺ e HLA-DR⁺ em monócitos CD14⁺. Nossos resultados demonstraram que o Bz induziu uma modulação negativa da ativação celular em células T CD4⁺ e CD8⁺ por aumentar a expressão de CTLA-4 e por promover a diminuição de HLA-DR em monócitos, além de reduzir a produção de IL-2 e IFN-γ em PBMC infectadas in vitro com a CCol, quando comparadas ás células sem tratamento. Portanto, por induzir essa inibição da resposta celular acreditamos que a utilização de Bz poderia trazer benefício ao indivíduo infectado por cepas de T. cruzi resistentes ao Bz, se os esquemas de tratamento pudessem ser personalizados de acordo com o tipo de cepa albergada pelo indivíduo.
dc.descriptionCAPES
dc.descriptionThe drug recommended for the treatment of the disease in Brazil is benzonidazole (Bz) and currently its use in the chronic phase of Chagas disease is to prevent or delay the evolution of the disease to more severe clinical forms. We believe that the success of the treatment depends on the synergism between the trypanocidal action of Bz and the immune response of the host. Our study evaluated the in vitro-infected peripheral blood mononuclear cells (PBMC) with a Trypanosoma cruzi strain that has resistance to Bz, Colombian strain (CCol), and addition of the treatment with Bz. Blood from volunteer non-diseased individuals (n = 11) was collected in a vacuum system in tubes containing sodium heparin. Mononuclear cells were separated by density gradient centrifugation by Ficoll Hypaque PLUSTM. PBMCs were deposited in 48 well plates (1 x 106 cells / ml) for adhesion of adherent cells / monocytes for 1h. Then, the non-adherent cells (lymphocytes) were removed and reserved. and the CCol trypomastigotes were added (2.5 x 105 parasites / well) for 2h. The parasites that did not internalize were removed by washing and finally, the lymphocytes were readmitted and treatment with Bz was added. Co-cultures were incubated for 24h, 5 and 10 days. The culture supernatants were stored at -20 ° C for the cytometric beads array (CBA), and with the cytokines (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN- co-cultivation cells, immunophenotyping for CD28 + and CTLA-4 + molecules was performed on CD4 + and CD8 + lymphocytes, and CD80 +, CD86 + and HLA-DR + on CD14 + monocytes. Our results demonstrated that Bz induced a negative modulation of cell activation in CD4 + and CD8 + T cells by enhancing CTLA-4 expression and by promoting the decrease of HLA-DR in monocytes, in addition to reducing the production of IL-2 and IFN -γ in PBMC infected in vitro with CCol, when compared to untreated cells. Therefore, by inducing such inhibition of the cellular response we believe that the use of Bz could bring benefit to the individual infected by Bz resistant T. cruzi strains if the treatment schemes could be customized according to the type of strain housed by the individual.
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal de Pernambuco
dc.publisherUFPE
dc.publisherBrasil
dc.publisherPrograma de Pos Graduacao em Medicina Tropical
dc.rightsopenAccess
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
dc.subjectTrypanosama cruzi
dc.subjectTratamento farmacológico
dc.subjectCitocinas
dc.titleEfeito do benzonidazol sobre as células mononucleares submetidas à infecção in vitro com uma cepa de trypanosoma cruzi resistente ao tratamento
dc.typemasterThesis


Este ítem pertenece a la siguiente institución