doctoralThesis
Produção de partículas semelhantes a vírus (VLPs) do vírus da Hepatite A para fins diagnósticos e vacinais
Autor
CAIADO, Bruna Varginha Ramos
Institución
Resumen
A hepatite A é uma doença viral aguda que acomete milhares de pessoas em todo mundo. As vacinas e testes diagnósticos para prevenção e detecção da doença são considerados de alto custo, devido a dificuldade do crescimento do vírus em meio de cultura. Uma alternativa para a produção desses insumos baseia-se na obtenção de Partículas Semelhantes a Vírus (VLPs), que são estruturas compostas de proteínas estruturais que mimetizam a partícula viral sem, no entanto, carrear o material genético do vírus. Este trabalho teve como objetivo principal avaliar abordagens para a geração de VLPs do Vírus da Hepatite A – HAV, como insumo para desenvolvimento de vacinas e testes diagnósticos. Três estratégias com potencial de mimetizarem o vírus, formando suas VLPs, foram testadas para expressão em células de inseto. Em todas as abordagens foram obtidas as proteínas virais, entretanto apenas na terceira foi possível detectar a montagem das VLPs. O estudo foi um dos pioneiros na literatura a demonstrar a visualização de VLPs de HAV, produzidas em sistema heterólogo de expressão. A obtenção de VLPs de HAV tem um enorme potencial na produção de antígenos vacinais/diagnóstico, sem a necessidade da utilização de partículas virais infectivas. Além disso permite a produção em larga escala do antígeno com um custo final relativamente reduzido, apresenta uma maior segurança pois as VLPs não tem capacidade de se autoreplicar como o vírus selvagem, utilizado nas formulações vacinais disponíveis no mercado. CAPES Hepatitis A is an acute viral illness that affects thousands of people around the world. Vaccines and diagnostic tests for disease prevention and detection are considered to be costly because of difficulty in growing the virus in culture medium. An alternative for the production of these inputs is based on obtaining of Virus-like Particles (VLPs) that are structures composed of structural proteins that mimic the viral particle without, however, carrying the genetic material of the virus. This work had as main objective the generation of VLPs of Hepatitis A Virus - HAV, as an input for the development of vaccines and diagnostic tests. Three strategies with potential to mimic the virus, forming their VLPs, were used for expression in insect cells. In all strategies the viral proteins were obtained, but only in the third it was possible to detect the assembly of the VLPs. This study was the first of the literature demonstrating the visualization of HAV VLPs, produced in a heterologous expression system. Obtaining HAV VLPs has enormous potential in the production of vaccine/diagnostic antigens, without the need for the use of viral infective particles. In addition to allowing the large-scale production of the antigen with a relatively low final cost, it is safer because VLPs do not have the ability to self-replicate like the wildtype virus used in commercially available vaccine formulations.