masterThesis
Liberação de ocitocina e efeito da estimulação por corrente contínua na dura-máter cerebral de ratos wistar - um estudo in vitro
Autor
ALMEIDA, Camila Carolinne Silva de
Institución
Resumen
Os efeitos da estimulação por corrente contínua in vitro sobre a secreção de peptídeos envolvidos na fisiopatogenia e na modulação da dor da migrânea tem sido investigados. A liberação de substâncias vasoativas, pela dura-máter cerebral, explica, em parte, o processo de inflamação neurogênica responsável pela manutenção da fase dolorosa, durante uma crise de migrânea. Em contrapartida, a liberação de ocitocina pelos neurônios do gânglio trigeminal parece ter um efeito protetor na sintomatologia dolorosa dessa doença. No entanto, até onde é de nosso conhecimento, não há evidência da liberação de ocitocina pela dura-máter. Desse modo, especula-se a presença de ocitocina na dura-máter cerebral, assim como, possíveis os efeitos da estimulação in vitro dessa meninge, por corrente contínua, sobre a liberação desse hormônio. Portanto, o objetivo desse estudo é avaliar a liberação de ocitocina pela dura-máter cerebral e o efeito da estimulação por corrente contínua, in vitro, sobre a liberação de ocitocina pela dura-máter cerebral de ratos Wistar. Trata-se de um estudo experimental in vitro (Processo nº CEUA 0006/2015), envolvendo 25 ratos Wistar machos, com idade entre 82 a 103 dias (93±5) e peso variando de 256 a 381gramas (318±30 gramas). Inicialmente, os animais foram eutanasiados por decapitação e tiveram o tecido epitelial, muscular e a mandíbula removidos. Em seguida, foi realizado um corte sagital no crânio, o encéfalo foi extraído cuidadosamente, permanecendo a dura-máter cerebral intacta e ligada a cada hemicrânio. O total de 50 hemicrânios provenientes destes animais foi distribuído em quatro grupos experimentais: controle (n=16), sham (n=17), estimulação anódica (n=9) e estimulação catódica (n=8). Nos grupos estimulados padronizou-se a realização da estimulação por corrente contínua na dura-máter do hemicrânio direito e no grupo sham, para a colocação dos eletrodos foi utilizado o hemicrânio oposto do mesmo animal, entretanto, não houve passagem da corrente elétrica. No grupo controle, não foi realizada nenhuma intervenção. Os parâmetros elétricos da corrente utilizados foram: intensidade- 0,5mA; densidade- 333μmA/cm2; duração- 10 minutos. Todo experimento foi composto por cinco etapas: Pré-incubação; Incubação 1; Estimulação por corrente contínua; Incubação 2; Estimulação química com KCl (56mM). Foi observada liberação de ocitocina pela dura-máter, com resultado significativo após estimulação com KCl (p<0,05; teste de Wilcoxon). A liberação de ocitocina pela dura-máter dos hemicrânios não diferiram entre os grupos controle, sham, estimulação anódica e catódica (p=0,36; teste de Kruskal-Wallis). Não foi observada diferença na liberação de ocitocina entre o hemicrânio esquerdo e direito nos grupos: [(controle: p=0,15; estimulação anódica: p=0,46; estimulação catódica: p=0,46); teste de Wilcoxon]. Em nosso estudo, foi demonstrada liberação de ocitocina pela dura-máter cerebral. Entretanto, não houve liberação significativa de ocitocina, pela dura-máter cerebral de ratos Wistar, após estimulação por corrente contínua in vitro. CNPq The effects of in vitro stimulation by direct current on the secretion of peptides involved in the pathophysiology and pain modulation of migraine have been investigated. The release of vasoactive substances by the cerebral dura mater explains in part, the process of neurogenic inflammation responsible for maintaining the pain phase during a migraine attack. In contrast, a release of oxytocin by the trigeminal ganglion neurons appears to have a protective effect on the painful symptomatology of this disease. However, to the best of our knowledge, there is no evidence of oxytocin release by the dura mater. Thus, it is speculated the presence of oxytocin in the cerebral dura mater, as well as, possible influences of the in vitro stimulation of this meninge, by direct current, on the release of this hormone. Therefore, the objective of this study is to evaluate the release of oxytocin by the cerebral dura mater and the effect of in vitro direct stimulation on the release of oxytocin by cerebral dura mater of Wistar rats. This is an in vitro experimental study (Process nº CEUA 0006/2015), involving 25 male Wistar rats, aged between 82 to 103 days (93±5 dias) and weight ranging from 256 to 381grams (318±30 grams). Initially, the animals were euthanized by decapitation and had epithelial, muscle and jaw tissue removed. Then a sagittal cut was made in the skull, the encephali was carefully extracted, the cerebral dura mater remained intact and attached to each hemicrania. The total of 50 hemicrania from these animals was distributed in four experimental groups: control (n=16), sham (n=17), anodic stimulation (n=9) and cathodic (n=8). In the stimulated groups standardized the stimulation by direct current in the dura mater of the right hemicrania and in the sham group, for the placement of the electrodes was used the opposite hemicrania of the same animal, however, there was no passage of electric current. In the control group, no intervention was performed. The electrical parameters of the current used were: intensity-0.5mA; density-333μA/cm2; duration-10 minutes. Each experiment was composed of five steps: Pre-incubation; Incubation 1; Stimulation by direct current; Incubation 2; Chemical stimulation with KCl (56mM). Release of oxytocin by the dura mater was observed, with significant result after stimulation with KCl (p<0.05; Wilcoxon test). The release of oxytocin by the hemicranial dura mater did not differ between the control, sham, anodic and cathodic stimulation (p=0.36, Kruskal-Wallis test) groups. There was no difference in oxytocin release between the left and right hemicrania in the groups: [(control: p=0.15; anodic stimulation: p=0.46; cathodic stimulation; p=0.46); Wilcoxon's test]. In our study, release of oxytocin by the cerebral dura mater was demonstrated. However, there was no significant release of oxytocin from the cerebral dura mater of Wistar rats after in vitro direct current stimulation.