masterThesis
Modelo biológico aplicado em leveduras quanto à habilidade de aderência e formação de biofilme na superfície de cones vaginais
Autor
PONTES, Vanessa Marques Barreto
Institución
Resumen
A incontinência urinária é caracterizada pela perda involuntária de urina e representa um problema social e higiênico que interfere na vida social e profissional dos acometidos. Quando assosciada a infecção do trato urinário, pode conduzir a uma piora clínica do quadro, aumentando os episódios de perda e predispondo os indivíduos a infecçōes sistêmicas. As leveduras do gênero Candida fazem parte da microbiota normal da mucosa vaginal e um dos seus principais fatores de virulência são a capacidade de aderir e formar biofilmes. O biofilme é caracterizado por agregados de microrganismos que podem aderir entre si e formar estruturas mais complexas em tecidos vivos ou superfícies de biomateriais promovendo o desenvolvimento de infecção. A formação de biofilme em alguns dispositivos como os cones vaginais utilizados no tratamento de mulheres incontinentes, ainda não foi analisado. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a capacidade formação de biofilme por Candida albicans sobre a superfície dos cones vaginais. As 7 cepas de Candida albicans de secreção vaginal, selecionadas da Coleção de Cultura URM, foram avaliadas quanto a habilidade de formação de biofilme. As suspensões dos isolados foram padronizadas e os testes realizados em microplacas de fundo chato com 96 poços, incubadasa à 37°C, por 24 e 48 horas. Os biofilmes de Candida albicans foram produzidos sobre segmentos de cones vaginais e introduzidos em poços de placas de microtitulação, sendo incubados à 37°C em contato com as suspensões de leveduras durante 24 e 48 horas. A atividade metabólica das células no biofilme formado sobres os cones foi analisada pelo método MTT. Na avaliação do biofilme formado em 24 horas, 5 isolados apresentaram atividade fraca e um isolado atividade forte. Após 48 horas, 4 reveleram atividade moderada no biofilme formado. O biofilme formado por C. albicans 743, produziu o maior valor de absorvância sendo estatisticamente maior quando comparados com as demais espécies. Quanto a atividade metabólica as células de C. albicans 4990, C. albicans 5900 e C. albicans 743 aderidas ao cone, após 24h, apresentaram atividade de 1.74±0.39, 2.06±0.41e 0.43±0.02, respectivamente. C. albicans 4987, C. albicans 6974, C. albicans 743 e a cepa de referência ATCC 90028 após 48h de incubação apresentaram atividade de 1.50±0.35, 1.52±0.46, 0.54±0.47 e 1.45±0.15, respectivamente. O biofilme de Candida albicans 5900, cultivado nos segmentos dos cones de diferentes cores, foi o que apresentou maior atividade nos cones amarelo, vermelho e branco, nas primeiras 24h. Urinary Incontinence is characterized by the involuntary loss of urine and represents a social and hygienic concern interfering in the social and professional life of patients. When the infection of the urinary tract is associated, it can lead to a clinical exacerbation of the disease, besides increased episodes of loss and predisposition of individuals and infections. Candida yeasts are part of the normal microbiota of the vaginal mucosa and one of the main virulence factors is the ability to adhere and form biofilms. Biofilm is characterized by aggregates of microorganisms that can adhere to each other and form more complex structures in living tissues or biomaterial surfaces promoting the development of infection. The formation of biofilms in some devices such as vaginal cones used for the treatment of women that present incontinency has not been analyzed yet. The objective of this research was evaluating the capacity of biofilm formation by Candida albicans on the surface of vaginal cones. The 7 strains of Candida albicans of vaginal secretion, selected from the URM Culture Collection, were evaluated for the ability of biofilm formation. Isolate suspensions were standardized and assays were performed in 96 well flat bottom microplates that were incubated at 37 ° C for 24 and 48 hours. Candida albicans biofilms were produced on segments of vaginal cones, introduced into wells of microtiter plates and incubated at 37 ° C in contact with the yeast suspensions for 24 and 48 hours. The metabolic activity of the non-biofilm cells formed on the cones was analyzed by the MTT method. In the evaluation of biofilm formed in 24 hours, 5 isolates presented weak activity and one isolated strong activity. After 48 hours, 4 revealed moderate activity in the formed biofilm. The biofilm formed by C. albicans 743, showed the highest absorbance value, which was statistically higher in comparison to other species. As for the metabolic activity, the cells of C. albicans 4990, C. albicans 5900 and C. albicans 743 adhered to the cone after 24h presented activity of 1.74±0.39, 2.06±0.41 and 0.43±0.02, respectively. C. albicans 4987, C. albicans 6974, C. albicans 743 and the reference strain ATCC 90028 after 48 h of incubation presented activity of 1.50±0.35, 1.52±0.46, 0.54±0.47 and 1.45±0.15 respectively. The biofilm of Candida albicans 5900, cultivated in the segments of the cones of different colors, showed the highest activity in the yellow, red and white cones for the first 24 hours.