masterThesis
Quantificação de ácidos graxos da biomassa de Mucorales Coprófilos do semiárido de Pernambuco
Autor
SOUZA, Carlos Alberto Fragoso de
Institución
Resumen
Mucorales são fungos morfologicamente simples pertencentes ao subfilo Mucoromycotina, caracterizados pela produção de esporos de origem sexuada, denominados zigósporos. Em maioria, esses microrganismos são sapróbios e comumente isolados de solo, excrementos, grãos estocados, plantas, de outros fungos, de vertebrados e invertebrados. Embora os Mucorales tenham sido estudados em alguns países, como Brasil, Estados Unidos, China, Índia e Inglaterra, poucos são os relatos sobre a comunidade desses fungos em regiões semiáridas. Espécies dessa ordem têm sido amplamente estudadas, não apenas pelas relações ecológicas que estabelecem com outros seres nos ecossistemas, mas pelo elevado potencial biotecnológico que apresentam, tendo algumas sido citadas como promissoras para a produção de biosisel. Desta forma, essa dissertação teve como objetivos inventariar e comparar as comunidades de Mucorales em excrementos de diferentes espécies e raças de animais herbívoros do semiárido de Pernambuco, pela frequência de ocorrência e riqueza de espécies, bem como conhecer e quantificar os ácidos graxos da biomassa dos táxons. Foram realizadas oito coletas de excrementos de bovinos (Bos taurus L.), caprinos (Capra hircus L.) e ovinos (Ovis aries L.) nas estações do Instituto Agronômico de Pernambuco (IPA), localizadas nas cidades de Arcoverde, Serra Talhada e Sertânia. As amostras foram acondicionadas em sacos plásticos limpos, transportadas ao laboratório e incubadas em câmaras úmidas, em triplicata, por 10 dias. Para a extração de ácidos graxos, inóculos utilizados para o crescimento em meio líquido foram obtidos a partir de culturas crescidas em placas de Petri contendo BDA durante cinco dias a 28ºC. Após este período, blocos de gelose foram transferidos para os Erlenmeyers contendo 100 mL de MEA e incubados a 28°C por 7 dias, sob rotação. Após o crescimento, 10 mg da biomassa de cada espécie foram pesadas para a extração e metilação dos ácidos graxos e, em seguida, analisadas por cromatografia gasosa. Foram isolados 24 táxons de Mucorales distribuídos entre Absidia, Circinella, Cunninghamella, Lichthemia, Mucor, Pilobolus, Rhizopus e Syncephalastrum. Os excrementos de ovinos apresentam maior riqueza de espécies de Mucorales, seguidos pelos de bovinos, sendo M. circinelloides f. griseocyanus o mais frequente, seguido por M. ramosissimus. A composição das espécies de Mucorales foi mais similar entre as raças Guzerá e Sindi (bovinos), seguidas por Girolando (bovino) e Morada Nova (ovino). Treze ácidos graxos diferentes foram encontrados na biomassa dos Mucorales, estando os ácidos palmítico e o oléico presentes em todas as espécies analisadas. Maiores concentrações de ácidos graxos foram verificadas para o ácido oléico em M. circinelloides f. griseocyanus e em C. echinulata var. echinulata, tendo Lichtheimia brasiliensis apresentado a mais variada composição desses ácidos. FACEPE Mucorales are morphologically simple Mucoromycotina characterized by the production of zygospores. These microorganisms are commonly isolated as saprobes from soil, dung, stored grain, plants, other fungi, vertebrates and invertebrates. Although these fungi have been studied in several countries, such as Brazil, USA, China, India and England, there are relatively few reports of these fungi in semiarid areas. Mucorales have been widely studied for the ecological relationships they establish with other beings in ecosystems. Some of these microorganisms have been cited as promising for industrial scale biodiesel production. Therefore, the aim of the present study was to assess and compare the Mucorales communities in the dung of different species and breeds of herbivores in the semiarid region of Pernambuco, based on the frequency of occurrence and species richness, as well as to quantify fatty acids from the biomass of the taxa. Eight samplings of cattle (Bos taurus L.), goat (Capra hircus L.) and sheep (Ovis aries L.) dung were performed at IPA (Instituto Agronômico de Pernambuco) stations in the cities of Arcoverde, Serra Talhada and Sertânia. The samples in triplicate were placed in clean plastic bags for transportation to the laboratory and then incubated in moist chambers for 10 days. For the extraction of fatty acids the inoculum used for the growth in liquid medium was obtained from cultures grown in Petri dishes containing PDA at 28ºC for five days. After this time blocks of agar were transferred to Erlenmeyer flasks containing 100 mL of MEA and incubated at 28 °C for 7 days under rotation. After cultivation, 10 mg of biomass was weighed for the extraction and methylation of fatty acids, before being analyzed using gas chromatography. Altogether, 24 taxa of Mucorales distributed among Absidia, Circinella, Cunninghamella, Lichthemia, Mucor, Pilobolus, Rhizopus and Syncephalastrum were identified. The highest species richness was found in sheep excrement. Mucor circinelloides f. griseocyanus was the most common taxon, followed by M. ramosissimus. The similarity of the composition of Mucorales species was greatest between the Guzerá and Sindi breeds (cattle), followed by Girolando (cattle) and Morada Nova (sheep). Thirteen different fatty acids were found in the biomass of the Mucorales, with palmitic and oleic acid found in all species. The greatest fatty acid concentrations were found for oleic acid in M. circinelloides f. griseocyanus and C. echinulata var. echinulata. Lichtheimia brasiliensis exhibited the most varied composition of these acids.