masterThesis
Correlação entre sítios de DNAr 45S e regiões organizadoras nucleolares em espécies do gênero Nothoscordum Kunth (Amaryllidaceae)
Autor
BAEZ, Mariana Alejandra
Institución
Resumen
GUERRA FILHO, Marcelo dos Santos, também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: GUERRA, Marcelo Os genes ribossomais são os genes mais estudados e melhor conhecidos nos eucariotas e sua exata localização nos cromossomos é conhecida em milhares de espécies. Os genes ribossomais 18S-5,8S-25S se localizam em um ou vários locos no genoma, chamados de sítios de DNAr 45S. A transcrição destes genes forma nos cromossomos metafásicos, regiões menos condensadas conhecidas como constrições secundárias ou regiões organizadoras de nucléolos (RONs). Em geral, ocorre apenas um par de sítios por cariótipo, mas em alguns genomas são detectados vários locos de DNAr 45S, sendo que nem sempre todos são ativos transcricionalmente, sugerindo que alguns sítios podem ser inativos temporária ou permanentemente. A expressão desses sítios pode ser avaliada pela coloração com nitrato de prata, que cora as proteínas nucleolares detectando os nucléolos e as RONs que apresentaram atividade transcricional na intérfase anterior. Contudo, a sensibilidade dessa técnica tem sido questionada principalmente porque alguns sítios nunca aparecem corados. Além disso, não se sabe se todos os sítios são funcionais ou se o tamanho ou a posição deles no cromossomo influencia na sua ativação. O gênero Nothoscordum apresenta espécies com cromossomos grandes, pouco numerosos e com alta variabilidade em número e posição dos sítios de DNAr, sendo um material ideal para avaliar a expressão dos sítios múltiplos. Sete espécies (10 citótipos diferentes), cujos sítios de DNAr já têm distribuição conhecida, foram analisadas utilizando duas técnicas diferentes de coloração com nitrato de prata, sendo uma delas mais eficiente na marcação das RONs enquanto a outra mais eficiente na coloração dos nucléolos em interfase. Os resultados sugerem que a ativação dos locos de DNAr não é ao acaso, mas é influenciada por sua distribuição no cromossomo. Assim, nas espécies com mais de um sítio de DNAr em um único cromossomo, raramente foi encontrada mais de uma RON. Em duas espécies que apresentaram sítios em cromossomos acrocêntricos e metacêntricos, observou-se que sítios nos acrocêntricos eram preferencialmente expressos. Em conjunto, esses dados indicam que apesar da variação no número de sítios de DNAr em Nothoscordum, os números modais de nucléolos e RONs se alteram muito pouco, levando à ativação preferencial de determinados sítios. Essa preferência provavelmente se deve a um conjunto de fatores, como número de cópias em cada sítio, posição no cromossomo e o ambiente genético de cada espécie. CAPES The ribosomal genes are the most studied and best known genes in eukaryotes and its exact location on the chromosomes is known for thousands of species. The ribosomal genes 18S-5.8S-25S are located at one or more loci in the genome, named 45S rDNA sites. The transcription of these genes form regions less condensed in the metaphasic chromosomes, known as secondary contrictions or nucleolar organizer regions (NORs). In general, there is only a couple of sites per karyotype, but in some genomes multiple 45S rDNA loci are detected, whereas not all of them are transcriptionally active, suggesting that some sites may be temporarily or permanently inactive. The expression of these sites can be assessed by silver staining, which strongly stain nucleolar proteins allowing the detection of nucleoli and NORs that were transcriptionally activeted in the preceding interphase. Moreover, it is unclear whether all sites are functional or if the size or position on the chromosome, influences its activation. The Nothoscordum genus presents species with few and large chromosomes with high variability in number and position of rDNA sites, being therefore an ideal material to evaluate the expression of multiple sites. Seven species (10 different cytotypes) whose 45S rDNA sites distribution is already known, were analyzed using two different silver staining techniques, one of which was more efficient staining NOR while the other was more efficient staining of nucleoli in interphase. The results suggest that activation of rDNA loci is not random, but is influenced by its distribution within the chromosome. Thus, in species with more than one rDNA site on a single chromosome, more than one RON was rarely found. In two species with sites in metacentric and acrocentric chromosomes, sites were preferentially expressed in acrocentric chromosomes. Together, this data indicate that despite of the variation in the number of rDNA sites in Nothoscordum, nucleoli and NORs modal number nearly do not change, leading to preferential activation of certain sites. This preference is probably due to a combination of factors, such as number of copies at each site, position within the chromosome and genetic environment of each specie.